一、基本信息

产品名称：PaqCI® rCutSmart CpG 限制性内切酶

产品货号：R0745S / R0745L

规格：200 units / 1000 units

保存温度：-20°C

二、产品介绍

PaqCI是一种IIs型限制性内切酶，是AarI的同裂酶。该酶识别非对称DNA序列并在识别位点外侧进行切割，其切割模式为CACCTGC(4/8)。该产品经过重组白蛋白（rAlbumin）重新配方，具有高切割效率和低星号活性，是进行大规模、多片段金门（Golden Gate）组装的理想工具酶。

三、产品应用

PaqCI® rCutSmart CpG适用于多种分子克隆应用，尤其擅长多片段DNA组装。

△金门组装：用于高效、无缝地组装多达50个以上的DNA片段，实现高通量克隆。

△高通量克隆：适用于自动化克隆流程，简化多基因构建操作。

△DNA消化：在提供PaqCI激活剂（PaqCI Activator）的条件下，可对含有多个识别位点的DNA底物进行完全消化。

四、产品优势

✅高切割效率：与同类酶相比，PaqCI能够实现完全消化，且不表现出星号活性，确保切割特异性。

✅优化配方：产品采用含重组白蛋白的rCutSmart™缓冲液体系，增强了酶的稳定性与活性。

✅专用激活剂：随产品提供PaqCI激活剂，可显著提高酶在底物识别位点较少时的切割效率，满足不同实验需求。

✅应用广泛：特别适用于复杂的大规模DNA组装项目，能够推动金门组装技术的极限。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配置：在反应管中加入DNA底物、1X rCutSmart™缓冲液及适量PaqCI激活剂。

2. 加酶反应：加入所需单位的PaqCI酶，轻柔混匀。

3. 温育消化：将反应体系置于37°C水浴或恒温金属浴中孵育，时间通常为1小时。

4. 失活纯化：反应结束后，可选择65°C加热20分钟使酶失活，或直接进行DNA纯化以用于后续连接等步骤。

六、注意事项

1. 激活剂使用：PaqCI需要多个识别位点才能实现有效切割，务必在反应中添加随附的PaqCI激活剂。进行金门组装时，激活剂用量需根据组装片段数量进行调整。

2. 甲基化影响：该酶的切割活性会受到CpG甲基化的抑制，实验设计时需考虑DNA模板的甲基化状态。

3. 储存条件：所有组分，包括酶、缓冲液及激活剂，均需保存于-20°C，避免反复冻融。

4. 缓冲体系：推荐使用随产品提供的rCutSmart™缓冲液以获得最佳酶活，在其他NEBuffer™中活性可能显著降低。

七、相关产品推荐

1. NEBridge® Golden Gate Assembly Kit (BsaI-HF®v2) （货号：E1601S/L）

2. 无核酸酶水 （货号：B1500S）

3. rCutSmart™缓冲液 （货号：B6004S）