一、基本信息

产品名称：DpnI 限制性内切酶

产品货号：R0176S / R0176L

规格：1,000 units / 5,000 units

保存温度：-20°C

二、产品介绍

DpnI是一种独特的甲基化依赖型限制性内切酶，特异性切割在5‘-GATC-3’序列处发生腺嘌呤甲基化（Dam甲基化）的DNA。该酶来源于肺炎链球菌，并在大肠杆菌中重组表达，现已采用重组白蛋白（rAlbumin）进行优化配方，以提升稳定性。其切割活性可被重叠的CpG甲基化所阻断。

三、产品应用

DpnI主要用于需要特异性识别和消化甲基化DNA的分子生物学实验。

△位点定向诱变：用于消化含有甲基化模板的PCR产物，以筛选突变克隆。

△快速克隆：与NEB其他试剂配合，可加速克隆工作流程。

△限制性酶切消化：用于分析DNA的甲基化状态或制备特定片段。

四、产品优势

✅特异性：严格依赖识别位点的腺嘌呤甲基化，对未甲基化DNA无活性，选择性高。

✅快速高效：具备Time-Saver™认证，可在5-15分钟内完成高效消化。

✅兼容性广：在rCutSmart™缓冲液中具有100%活性，该缓冲液兼容超过210种酶，便于进行双酶切。

✅即用便利：产品随附预染的6X紫色凝胶上样染料，简化后续电泳步骤。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配制：在冰上于适量无菌水中，依次加入10X rCutSmart™缓冲液、底物DNA和DpnI酶，混匀。

2. 温育反应：将反应体系置于37°C恒温设备中孵育5-15分钟（Time-Saver™条件）或1小时。

3. 终止失活：反应完成后，可将反应管置于80°C加热20分钟以使酶失活。

4. 电泳分析：取适量反应产物，与随附的6X紫色凝胶上样染料混合，进行琼脂糖凝胶电泳分析。

六、注意事项

1. 甲基化依赖性：本酶仅切割来源于dam+大肠杆菌菌株（如DH5α、JM109）的甲基化DNA模板，对体外合成的未甲基化PCR产物无切割作用。

2. 活性抑制：当识别位点存在重叠的CpG甲基化（常见于哺乳动物基因组DNA）时，酶的切割活性会受到完全阻断。

3. 缓冲体系：为获得最佳活性，推荐使用随附或单独购买的rCutSmart™缓冲液。

4. 保存条件：酶制剂应始终保存于-20°C，使用时置于冰上，避免反复冻融。

七、相关产品推荐

1. rCutSmart™缓冲液（货号：B6004S）

2. 紫色凝胶上样染料，6X（货号：B7024S）