一、基本信息

产品名称：T4 DNA Ligase

产品货号：M0202S / M0202T / M0202L / M0202M

保存温度：-20°C

二、产品介绍

T4 DNA Ligase是一种高效的DNA连接酶，能够催化相邻DNA或RNA链的5‘-磷酸末端与3’-羟基末端之间形成磷酸二酯键。该酶适用于连接平末端、粘性末端以及修复DNA单链缺口，是分子克隆、文库构建等实验中的核心工具酶。

三、产品应用

T4 DNA Ligase广泛应用于多种分子生物学实验，主要应用包括：

△克隆连接：用于常规限制性片段克隆，将插入片段连接至载体。

△接头/适配子连接：用于将平末端DNA片段与接头或适配子进行连接。

△缺口修复：用于修复双链DNA中的单链缺口。

△高级组装：适用于如BioBrick®组装、NEBridge® Golden Gate组装等高复杂度克隆策略。

四、产品优势

✅行业标准：作为广泛认可的行业标准品，其连接效率和可靠性经过充分验证。

✅高纯度：经过严格的质控检测，确保核酸酶污染极低，保障连接产物的完整性。

✅高浓度：提供高浓度酶液，可满足高通量文库克隆等大体系或高要求实验。

✅缓冲兼容性：在补充ATP的条件下，可兼容多种限制性内切酶缓冲液，便于多酶连续反应。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配制：在冰上配制含有1X T4 DNA Ligase反应缓冲液、DNA底物和适量T4 DNA Ligase的反应体系。

2. 温育连接：将反应体系置于16°C水浴或恒温设备中温育，粘性末端连接通常需30分钟至1小时，平末端连接建议延长至2小时或过夜。

3. 反应终止：连接完成后，可将反应体系置于65°C孵育10分钟以热灭活酶，或直接用于后续转化等实验。

六、注意事项

1. 辅因子：ATP为该酶活性所必需的辅因子，反应缓冲液中已含有，无需额外添加。

2. 酶液保存：酶液应始终保存于-20°C，避免反复冻融。稀释储存的酶液时需使用含50%甘油的专用稀释缓冲液。

3. 底物要求：有效的连接反应要求DNA底物具有完整的5‘-磷酸基团和3’-羟基基团。

4. 温度选择：为获得最佳连接效率，特别是对于平末端连接，推荐在16°C下进行。室温连接可作为快速替代方案，但效率可能有所不同。

七、相关产品推荐

1. Quick Blunting™ Kit (货号：E1201S/L)

2. T4 DNA Ligase Reaction Buffer (货号：B0202S)

3. NEBridge® Golden Gate Assembly Kit (货号：E1601S/L)

4. Nuclease-free Water (货号：B1500S/L)