一、基本信息

产品编号：R5001/R5002

核心特点：快速可靠、高效转化、高回收率、广谱适用

产品描述：EZ RNA Methylation™ 试剂盒是一款专为RNA甲基化分析设计的亚硫酸氢盐转化试剂盒。该试剂盒通过优化的化学反应，将RNA中的非甲基化胞嘧啶特异性转化为尿嘧啶，同时有效保护5-甲基胞嘧啶不被转化，从而为后续的测序或PCR分析提供准确的甲基化状态信息。其流程集成了转化与纯化步骤，最大程度减少了RNA在处理过程中的降解与损失。

二、产品应用

EZ RNA Methylation™ 试剂盒适用于对RNA样品进行亚硫酸氢盐处理，以进行甲基化位点分析。

△RNA甲基化测序：为高通量测序（如BS-Seq）制备经亚硫酸氢盐转化的RNA模板。

△甲基特异性PCR（MSP）：为基于PCR的甲基化检测方法（如MSP、qMSP）提供转化后的RNA。

△表观转录组学研究：用于分析m6A、m5C等RNA甲基化修饰在基因表达调控中的作用。

△阳性对照建立：利用试剂盒提供的引物，以28S rRNA为模板建立实验阳性对照体系。

三、产品优势

✅高效转化：可实现超过99%的非甲基化胞嘧啶向尿嘧啶的转化效率，同时保证超过99%的5-甲基胞嘧啶得到保护。

✅高回收率：RNA回收率高于80%，确保有足量模板用于下游分析。

✅操作简便：试剂预混，无需额外配制缓冲液，流程整合了转化与纯化步骤。

✅广谱适用：适用于32 ng至3 µg范围内的DNA-free RNA输入，兼容各类RNA样品。

✅稳定性好：所有组分可室温保存，试剂盒自购买日起一年内保证性能稳定。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 样品混合：在含有20 µl RNA样品的PCR管中加入130 µl RNA转化试剂。

2. 热循环转化：将混合物于70°C孵育5分钟，随后54°C孵育45分钟，完成后可置于4°C保存长达20小时。

3. 结合纯化：将转化后的样品转移至已装有RNA结合缓冲液的Zymo-Spin™ IC离心柱中，混匀。

4. 洗涤除杂：向柱中加入乙醇，离心后依次使用RNA洗涤缓冲液和RNA去磺化缓冲液进行洗涤。

5. RNA洗脱：使用无DNase/RNase的水洗脱柱上纯化的RNA。

6. 产物保存：将洗脱的RNA于-20°C保存不超过3个月，或于-70°C长期保存。

五、注意事项

1. 样品预处理：RNA样品在转化前应溶解于无核酸酶水中，并使用DNase I处理以去除基因组DNA污染。

2. 试剂准备：使用前需按说明书要求，向RNA洗涤缓冲液浓缩液中加入指定体积的无水乙醇进行稀释。

3. 下游扩增：建议使用“热启动”DNA聚合酶对亚硫酸氢盐转化后RNA逆转录得到的cDNA进行PCR扩增，以提高特异性。

4. 产物保存：转化后的RNA应避免反复冻融，短期保存于≤-20°C，长期保存需置于≤-70°C。

5. RNA质量：为获得最佳效果，建议使用纯度高、完整性好的RNA，输入量以0.5-1 µg为佳。

六、相关产品推荐

1. EZ DNA Methylation Kit（货号：D5001 / D5002）

2. EZ DNA Methylation-Gold Kit（货号：D5005 / D5006）

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