一、基本信息

产品编号：D5001（50次反应）

核心特点：高转化率、低损失、简化流程

产品描述：
EZ DNA Methylation™ Kit 基于细胞嘧啶（C）与亚硫酸氢钠反应的三步转化原理，将非甲基化胞嘧啶高效转化为尿嘧啶（U）。创新的脱硫（Desulphonation）技术替代传统沉淀过程，减少样本损失，同时通过优化缓冲系统最大限度降低模板降解。试剂盒可从各种高质量、无 RNA 的 DNA（包括基因组 DNA、限制性内切酶消化 DNA、线性化质粒 DNA）中进行转化，获得的 DNA 转化率可达 >99%，回收率可超过 80%，且适用于 NGS 文库制备、PCR 扩增、测序、内切酶消化以及芯片分析等多种下游步骤。

二、产品应用

本试剂盒获得的高质量转化 DNA 适用于：

△ 二代测序文库制备（Next-generation sequencing library preparation）
△ PCR 扩增（PCR amplification）
△ 限制性内切酶消化（Restriction digestion）
△ DNA 测序（Sequencing）
△ 微阵列分析（Microarray analysis）
△ Illumina Infinium MethylationEPIC 芯片检测

三、产品优势

✅ 高效转化：非甲基化胞嘧啶转化率 >99%，适用多种来源 DNA 样本。
✅ 高回收率：转化 DNA 回收率 >80%，最大程度减少损失。
✅ 简化流程：创新脱硫技术替代繁琐沉淀，节省时间与操作步骤。
✅ 下游兼容性强：转化 DNA 可直接应用于 NGS、PCR、芯片等分析平台。
✅ 减少模板降解：缓冲体系优化降低处理过程中的 DNA 损伤。
✅ 适用范围广：可处理 500 pg – 2 µg DNA，最低可回收 ≥50 bp 片段。

四、使用说明（实验流程概要）

1. DNA输入：准备 500 pg–2 µg 高质量、无 RNA DNA。
2. 亚硫酸氢盐转化：依据说明书，将 DNA 与 CT Conversion Reagent 反应，完成胞嘧啶到尿嘧啶的转化。
3. 结合与洗涤：将反应产物转移至 Zymo-Spin IC 柱，通过 M-Binding Buffer、M-Wash Buffer 洗涤去除残余试剂。
4. 脱硫处理：加入 M-Desulphonation Buffer，于柱上完成脱硫反应。
5. 洗脱与回收：用 ≥10 µl M-Elution Buffer 洗脱转化 DNA，即可进行下游分析。

处理耗时约 12–16 小时，所需设备包括微量离心机和带加热盖的 PCR 仪。

五、注意事项

1. 储存：转化 DNA 于 -20 °C 可稳定保存 1–3 个月，长期保存建议 ≤-70 °C，避免反复冻融。
2. 脱硫时间：不建议超过 20 分钟，否则可能导致 DNA 降解与产量下降。
3. 引物设计：建议参考官网 Bisulfite Primer Seeker 工具。
4. 特定聚合酶推荐：ZymoTaq DNA Polymerase 专为亚硫酸氢盐转化 DNA 扩增设计，可显著提升扩增效率。
5. 定量方法：转化前使用 dsDNA 定量方法，转化后应使用 ssDNA 定量方法以获得准确结果。
6. 安全：仅限科研用途，操作时请遵守实验室安全规范。

六、相关产品推荐

1. ZymoTaq DNA Polymerase（货号：E2001/E2002）：专为亚硫酸氢盐转化 DNA 扩增优化。
2. EZ DNA Methylation-Lightning Kit：更快速的亚硫酸氢盐转化方案。
3. DNA Clean & Concentrator 系列：适用于转化 DNA 的纯化与浓缩。
4. Illumina Infinium MethylationEPIC BeadChip 阵列：适合甲基化检测的下游平台。