一、基本信息
产品名称:TaKaRa Ex Taq® DNA Polymerase
产品货号:RR001Q / RR001A / RR001B / RR001C
规格: 50U / 250U / 1000U / 1000U×3
保存温度:-20℃
二、产品介绍
TaKaRa Ex Taq® DNA Polymerase是一种经基因工程改造的热稳定性DNA聚合酶,具有5‘→3’聚合酶活性及3‘→5’外切酶(校对)活性。该酶保真度高于普通Taq酶,适用于高保真PCR扩增。其扩增产物大部分为3‘端带“A”突出端的DNA片段,便于后续克隆操作。
三、产品应用
本产品主要用于DNA的聚合酶链式反应(PCR)扩增,具体应用包括:
△基因克隆:适用于需要高保真扩增的基因克隆实验。
△定点突变:用于需要高保真度的定点突变研究中的PCR步骤。
△DNA测序模板制备:为Sanger测序制备高保真的PCR产物模板。
△TA克隆:扩增产物可直接连接至T载体,简化克隆流程。
四、产品优势
✅高保真性:具备3‘→5’外切酶校对活性,相较于标准Taq DNA聚合酶,能显著降低PCR过程中的碱基错配率。
✅高纯度:经过严格质控,无核酸内切酶及外切酶污染,确保DNA模板的完整性。
✅便捷克隆:扩增产物3‘端通常带有一个“A”碱基,可直接用于TA克隆,无需额外的加A尾处理。
✅兼容冷启动:支持Cool Start操作,通过在冰上配制反应体系并立即启动热循环,可有效提高扩增特异性,减少引物二聚体等非特异性产物。
五、使用说明(实验流程概要)
1. 体系配制:在冰上按推荐比例混合DNA模板、引物、dNTP Mixture、10×Ex Taq Buffer及Ex Taq DNA聚合酶,最后用无菌水补足至总体积。
2. 程序设定:根据目标片段长度设置适宜的热循环程序,通常包括预变性、变性、退火、延伸等步骤。
3. 反应运行:将反应管置于热循环仪中,立即启动PCR程序。
4. 产物分析:程序结束后,取适量PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。
六、注意事项
1. 保存条件:所有组分需保存于-20℃,避免反复冻融,使用前请短暂离心并置于冰上。
2. 体系配制:建议在冰上配制反应混合液,并使用无菌、无核酸酶污染的耗材,以防止模板降解及污染。
3. 模板质量:使用高质量、纯度好的DNA模板,模板量建议不超过500 ng/50 μL反应体系。
4. 引物设计:确保引物特异性,避免形成引物二聚体或二级结构,终浓度建议在0.2-1.0 μM之间优化。
5. 变性温度:根据所用热循环仪的性能及反应管类型,合理调整变性步骤的温度与时间,通常98℃变性5-10秒或94℃变性20-30秒。
七、相关产品推荐
1. 10 × Ex Taq Buffer (Mg2+ plus)(货号:9152A)
2. 10 × Ex Taq Buffer (Mg2+ free)(货号:9152AM)
3. pMD™19-T Vector Cloning Kit(货号:6013)
4. PrimeSTAR® HS DNA Polymerase(货号:R010A)