一、基本信息

产品编号：E2003/E2004

核心特点：热启动、操作便捷、高特异性、适用于甲基化检测

产品描述：ZymoTaq PreMix是一种2X浓度的预混试剂，包含了进行热启动PCR所需的所有组分。其内含的热激活型耐热DNA聚合酶可有效减少常规PCR中可能出现的引物二聚体及非特异性产物。该产品专为亚硫酸氢盐处理DNA的扩增、基于SYBR Green或探针的实时与定量PCR而设计，能高效生成特异性扩增产物，副产物极少。其操作简便，仅需加入水、引物和模板DNA，并于95°C加热10分钟即可启动聚合反应。ZymoTaq™ DNA聚合酶具有3‘末端转移酶活性，可在扩增产物末端添加“A”突出，使其非常适合用于TA克隆。

二、产品应用

ZymoTaq PreMix是一款专为多种PCR应用设计的即用型预混液。

△甲基化分析：高效扩增经亚硫酸氢盐处理的DNA，用于DNA甲基化检测研究。

△实时定量PCR：兼容基于SYBR Green染料或水解探针（TaqMan）的实时荧光定量PCR（qPCR）。

△常规PCR扩增：适用于需要高特异性和高产率的目标DNA片段常规扩增。

△TA克隆：因聚合酶具有末端腺苷酸转移酶活性，扩增产物带A突出，可直接用于TA克隆。

三、产品优势

✅热启动：采用热激活型DNA聚合酶，在室温下无活性，有效抑制低温时引物非特异性退火及引物二聚体形成。

✅高特异性：优化的反应体系与热启动机制协同作用，显著降低非特异性扩增背景，获得单一、清晰的靶条带。

✅即用便捷：预混了缓冲液、dNTPs、镁离子及酶，仅需添加模板与引物即可完成反应体系配制，简化操作流程。

✅广泛兼容：特别适用于扩增难度高的亚硫酸氢盐修饰DNA，并兼容多种检测模式与下游克隆应用。

✅稳定高效：提供稳健的扩增性能，在不同模板与引物条件下均能实现高效、可重复的产物生成。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配制：取适量2X ZymoTaq™ PreMix，加入无菌无酶水、上下游引物（终浓度0.3-1 µM）及模板DNA（每50 µl反应体系建议<200 ng），补足至终体积。

2. 初始加热：将配制好的反应管置于热循环仪中，95°C孵育10分钟，以激活热启动酶并实现模板初始变性。

3. 循环扩增：随后进行30-40个循环的PCR扩增，每个循环包括94-96°C变性30秒，适宜温度下退火30-40秒，72°C延伸（每kb 30-60秒）。

4. 终末延伸：所有循环结束后，于72°C进行7分钟的终末延伸，以确保产物完整性。

5. 保存：反应完成后，可将产物置于4°C短期保存或-20°C长期保存，以备后续分析。

五、注意事项

1. 储存条件：本品应于-20°C保存，避免反复冻融以保证酶活稳定性；长期储存建议置于-80°C。

2. 体系优化：反应体系中MgCl2终浓度为1.75 mM，用户可根据具体实验需求（如引物/模板特性）对镁离子浓度、引物浓度及模板用量进行优化。

3. 循环参数：对于长度超过1 kb的扩增子，建议按每增加1 kb延伸时间相应延长15-30秒的原则调整延伸时间。

4. 引物设计：用于扩增亚硫酸氢盐处理DNA时，需遵循修饰后DNA的引物设计原则，以确保扩增效率与特异性。

六、相关产品推荐

1. ZymoTaq™ DNA聚合酶（货号：E2001/E2002）：包含独立的聚合酶、2X反应缓冲液与dNTP混合液，为用户提供灵活的PCR体系自配选择。