一、基本信息

产品编号：D4045/D4046

核心特点：快速纯化、高回收率、大片段兼容、低体积洗脱

产品描述：Zymo Research Large Fragment DNA Recovery Kit采用离心柱技术，用于从TAE或TBE缓冲液配制的琼脂糖凝胶中快速纯化高质量的大片段DNA，无需有机溶剂沉淀，整个流程约15分钟。

二、产品应用

Zymo Research Large Fragment DNA Recovery Kit适用于从琼脂糖凝胶中回收纯化后的DNA进行各类下游分子生物学实验。

△PCR：为PCR反应提供高纯度模板。

△测序：纯化后的DNA适用于Sanger测序等测序反应。

△酶切：回收的DNA可直接用于限制性内切酶消化。

△连接：纯化的DNA片段适用于连接酶连接反应。

△转化/转染：回收的高质量DNA可用于细菌转化或细胞转染。

三、产品优势

✅高效快速：基于离心柱的纯化流程可在约15分钟内完成，无需繁琐的沉淀步骤。

✅高纯度回收：独特的柱膜设计能有效去除琼脂糖、盐分及杂质，获得适用于敏感下游应用的高纯度DNA。

✅广泛片段兼容：可高效回收约50 bp至大于200 kb的DNA片段，涵盖基因组DNA、大质粒（如BAC/PAC）、病毒及噬菌体DNA等。

✅高载量与低体积洗脱：每柱载量最高可达10 µg DNA，并支持≥10 µl的低盐洗脱液或水进行洗脱，便于获得高浓度DNA。

✅高回收率：DNA回收率通常在70%至95%之间。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 缓冲液配制：使用前，按说明书要求向DNA Wash Buffer浓缩液中加入指定体积的无水乙醇。

2. 胶块切除：使用洁净刀片从琼脂糖凝胶中切下含目标DNA的胶块，转移至离心管中。

3. 溶解胶块：向胶块中加入3倍体积的Agarose Dissolving Buffer (ADB)，于55°C孵育至少10分钟，直至胶块完全溶解。

4. 上样结合：将完全溶解的溶液转移至Zymo-Spin™ IC-XL离心柱中，于11,000-16,000 x g离心1分钟，弃滤液。

5. 洗涤：向柱中加入200 µl DNA Wash Buffer，离心30秒，弃滤液。重复此洗涤步骤一次。

6. 洗脱：向柱基质中加入≥10 µl DNA Elution Buffer或水，静置1分钟后，离心30秒以洗脱DNA。

五、注意事项

1. 胶块溶解：务必确保胶块在55°C下完全溶解，未溶解的琼脂糖会堵塞柱膜，影响DNA结合与回收效率。

2. 温度控制：溶解胶块时温度不宜超过60°C，以免导致DNA变性。

3. 缓冲液保存：DNA Wash Buffer加入乙醇后需盖紧瓶盖以防蒸发，并按要求保存。

4. 洗脱操作：洗脱缓冲液应直接加至柱基质中心，并确保接触时间不少于1分钟，对于≥10 kb的大片段DNA尤为重要。

5. 避免污染：离心后，注意避免柱尖端接触收集管中的滤液，以防盐分或乙醇污染洗脱产物。

6. 大片段洗脱：对于≥50 kb的基因组DNA，建议使用预热至60-70°C的洗脱缓冲液，并延长柱上孵育时间，或进行二次洗脱以提高回收量。

7. 产品用途：本产品仅供研究使用，不用于诊断程序。操作时需佩戴防护手套及眼镜。

六、相关产品推荐

1. Zymoclean™ Gel DNA Recovery Kit（货号：D4001/D4002）：适用于回收50 bp至10 kb的DNA片段，提供未封盖离心柱规格。

2. Zymoclean™ Gel DNA Recovery Kit（货号：D4007/D4008）：适用于回收50 bp至10 kb的DNA片段，提供封盖离心柱规格。

3. ZR-96 Zymoclean™ Gel DNA Recovery Kit（货号：D4021/D4022）：96孔板形式的高通量DNA凝胶回收试剂盒。