一、基本信息

产品名称：microRNA Reverse Transcription Kit

产品货号：EZB-miRT4

规格：EZB-miRT4-S (20次反应，20μl/反应)；EZB-miRT4-L (50次反应，20μl/反应)

保存温度：-20°C

二、产品介绍

本试剂盒采用Poly(A)加尾与逆转录同步进行的策略，用于高效合成microRNA的cDNA第一链。其核心在于通过Poly(A)聚合酶对成熟miRNA的3‘端进行加尾，随后利用Oligo(dT)-Universal Tag通用引物启动逆转录。试剂盒整合了高效的基因组DNA去除步骤，并采用经过优化的酶混合物，确保了反应的特异性与高产量，专为后续的探针法qPCR检测设计。

三、产品应用

本microRNA Reverse Transcription Kit适用于将microRNA逆转录为cDNA，用于后续的定量PCR分析。

△microRNA表达分析：将样本中的microRNA逆转录为cDNA，用于qPCR定量检测。

△高通量筛选：适用于需要对大量样本进行miRNA表达谱分析的筛选实验。

△功能机制研究：为研究microRNA在基因调控、疾病发生发展等过程中的作用提供cDNA模板。

四、产品优势

✅特异性高：Poly(A)聚合酶可特异性识别成熟单链miRNA，有效避免对双链miRNA前体的非特异性逆转录。

✅去基因组污染：内置高效DNase，可在室温下5分钟内快速去除95%以上的基因组DNA污染。

✅高效灵敏：采用新型M-MLV突变体逆转录酶，具有优异的扩增效率和抗干扰能力，适用于低丰度miRNA的检测。

✅操作便捷：Poly(A)加尾与逆转录反应在同一体系内同步进行，简化了操作流程，缩短了实验时间。

✅兼容性强：优化后的反应体系与配套的探针法miRNA qPCR试剂盒兼容，确保检测结果的准确性与稳定性。

五、使用说明（实验流程概要）

1.  试剂准备：将gDNA Remover、miRNA RT Enzyme Mix和4x miRNA RT Buffer从-20°C取出，室温融化后充分混匀，短暂离心后置于冰上备用。

2.  基因组DNA去除：取100ng-1μg总RNA或10-20ng miRNA，与1μl gDNA Remover及无核酸酶水混合至13μl体系，轻柔混匀后室温（15-25°C）孵育5分钟。

3.  配制逆转录体系：向上一步的反应液中依次加入5μl 4x miRNA RT Buffer和2μl miRNA RT Enzyme Mix，配制为20μl总反应体系。

4.  反应体系混匀：使用移液器轻柔吹打反应液至少10次，确保各组分充分混匀。

5.  程序孵育：将反应管置于PCR仪中，运行逆转录程序：37°C孵育15分钟，42°C孵育10分钟，95°C加热3分钟使酶失活。

6.  产物处理：反应结束后获得的cDNA可直接用于qPCR，或根据靶基因表达丰度稀释5-10倍后使用。未立即使用的cDNA建议于-80°C保存。

六、注意事项

1. 保存条件：所有组分需长期保存于-20°C，避免反复冻融，使用时置于冰上。

2. RNA质量：使用高完整性、无降解的RNA样本是获得准确逆转录结果的前提。

3. 充分混匀：使用前及配制反应体系时，必须对试剂及反应液进行充分且轻柔的混匀，这是确保反应均一性的关键步骤。

4. 污染防护：实验操作全程需使用无核酸酶的耗材，并采取严格措施防止RNase污染。

5. 产物保存：逆转录得到的cDNA若需长期保存，应分装后置于-80°C冰箱，避免反复冻融。

七、相关产品推荐

1. EZ-press microRNA Reverse Transcription Kit PLUS (货号：EZB-miRT2-plus)

2. EZ-press Cell to cDNA Kit PLUS (for microRNA)(货号：EZB-miRT1)

3. EZ-Probe qPCR Master Mix for microRNA(货号：EZB-miProbe)