一、基本信息

产品编号：A0010CGQ/A0010CGQ-L

核心特点：快速高效、基因组DNA去除、高稳定性染料、兼容性佳

产品描述：本产品为新一代快速逆转录试剂盒，整合了高效的室温DNase消化反应体系与高稳定性蓝色染料标记的预混液。其核心组分包括gDNA Remover（含浓缩DNase及缓冲液）和4x RT Master Mix（含优化的M-MLV突变体逆转录酶、RNase抑制剂、dNTPs、Oligo dT18、Random Hexamer及缓冲液）。该试剂盒能在室温条件下于5分钟内有效降解超过95%的基因组DNA，并仅需15分钟即可完成高效逆转录，其产量相当于传统AMV逆转录酶1小时的产出。蓝色染料设计提供了加样可视化辅助，并能与特定SYBR Green qPCR预混液（含红色染料）配套使用，混合后呈现紫色，且不影响qPCR性能。逆转录产物推荐用于PCR或qPCR分析。

二、产品应用

本产品适用于从总RNA模板快速合成第一链cDNA，并特别适用于后续的实时荧光定量PCR（qPCR）分析。

△基因表达分析：通过qPCR对逆转录产物进行定量，检测特定基因的表达水平。

△基因组DNA去除：在逆转录前高效去除RNA样本中残留的基因组DNA污染，降低假阳性风险。

△快速cDNA合成：利用优化的酶和反应体系，在短时间内获得高质量的cDNA。

三、产品优势

✅高效除基因组DNA：经过特殊优化的DNase反应体系，可在室温5分钟内降解超过95%的基因组DNA，显著减少gDNA对定量结果的干扰。

✅快速逆转录效率：采用新型M-MLV突变体逆转录酶及优化体系，仅需15分钟反应即可达到传统方法1小时的cDNA产量，极大缩短实验周期。

✅可视化加样辅助：4x RT Master Mix中含有高稳定性蓝色染料，便于加样时观察，减少操作误差。

✅优异的配套兼容性：逆转录产物中的蓝色染料与配套的含红色染料SYBR Green qPCR Mix混合后变为紫色，该染料系统经证实不影响qPCR反应的特异性和灵敏度。

✅强大的抗干扰能力：所使用的逆转录酶具有优异的耐受性，能在一定程度上抵抗反应体系中常见的抑制剂。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 试剂准备：将gDNA Remover和4x RT Master Mix解冻，分别上下颠倒5-10次充分混匀，短暂离心后置于冰上备用。

2. gDNA去除：在无菌离心管中，加入100 ng至2 μg总RNA（建议1 μg），加入2 μl gDNA Remover，用试剂盒提供的无核酸酶ddH2O补足至15 μl总体积。轻柔吹打混匀，短暂离心后，于19-27°C孵育5分钟，完成后置于冰上。

3. 配制逆转录体系：向上一步处理好的RNA溶液中直接加入5 μl 4x RT Master Mix，构成20 μl总反应体系。

4. 反应液混匀：使用涡旋振荡器振荡10秒或使用移液器（建议调至18 μl刻度）轻柔吹打10次以充分混匀反应液，并短暂离心收集液滴。

5. 逆转录反应：将反应管置于PCR仪中，运行程序：42°C反应15分钟，随后95°C孵育30秒以灭活逆转录酶。

6. 产物处理：反应结束后所得溶液即为cDNA，可根据靶基因表达丰度，选择直接使用或将cDNA用无核酸酶水稀释5-10倍后，作为模板用于后续qPCR实验。

五、注意事项

1. 保存条件：所有组分应保存于-20°C，避免反复冻融，以保证24个月的有效期。

2. 试剂混匀：使用前务必充分混匀各组分，这是确保反应效率一致性的关键步骤。

3. RNA质量：推荐使用完整性好、纯度高的总RNA作为起始材料，以获得最佳逆转录效果。

4. 反应温度：gDNA去除步骤需严格在19-27°C室温条件下进行，温度过高可能导致DNase失活或RNA降解。

5. 产物应用：本试剂盒合成的cDNA产物主要推荐用于PCR或qPCR实验，不建议用于对cDNA完整性要求极高的基因克隆等应用。

6. 产物保存：若cDNA不立即使用，建议分装后于-80°C长期保存，以避免降解。

六、相关产品推荐

1. Color SYBR Green qPCR Mix（货号：A0012-R1/A0012-R2）：含有红色染料的SYBR Green I实时荧光定量PCR预混液，与本试剂盒逆转录产物（蓝色）配套使用，混合后呈紫色，方便加样监控。

2. Universal RNA Purification Kit（货号：EZB-RN4）：用于从多种样本中快速、高效地提取高纯度总RNA，为逆转录提供优质模板。