一、基本信息

产品货号：DP118-02/DP118-03

产品规格：50次/200次

产品描述：EndoFree Mini Plasmid Kit II是一款基于离心柱技术的无内毒素质粒DNA纯化试剂盒。该试剂盒通过硅胶膜特异性吸附质粒DNA，并利用独特的溶液P4和配套过滤柱CS有效去除内毒素、蛋白质及其他杂质，整个纯化流程可在约1小时内完成。适用于从5-15毫升过夜培养的大肠杆菌菌液中提取高纯度质粒DNA，所得产物适用于细胞转染、酶切、连接、PCR及测序等下游应用。

二、产品应用

EndoFree Mini Plasmid Kit II提取的质粒DNA适用于多种分子生物学及细胞生物学实验。

△细胞转染：适用于对纯度要求高的哺乳动物细胞转染实验。

△常规分子克隆：所得DNA可直接用于限制性内切酶消化、连接反应及PCR扩增。

△测序分析：纯化后的质粒DNA满足Sanger测序的模板要求。

△体外转录/翻译：可作为模板用于体外转录或体外翻译系统。

三、产品优势

✅低内毒素：通过优化的溶液P4和过滤柱CS步骤，高效去除内毒素，满足敏感细胞转染需求。

✅高纯度：结合硅胶膜吸附与去蛋白步骤，有效去除蛋白质、盐分及其他杂质，获得高纯度质粒DNA。

✅操作快捷：优化的实验流程，从菌液到纯化产物可在约1小时内完成。

✅高得率：针对5-15 ml菌液，对于高拷贝质粒可获得高达70 µg的DNA回收量。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 柱平衡：向吸附柱CP4中加入500 µL平衡液BL，12,000 rpm离心1分钟后弃废液。

2. 菌体收集：取5-15 mL菌液离心，弃尽上清，收集菌体沉淀。

3. 重悬：向沉淀中加入500 µL溶液P1，充分涡旋悬浮菌体。

4. 裂解：加入500 µL溶液P2，温和上下颠倒混匀6-8次以实现完全裂解。

5. 中和与沉淀：立即加入500 µL溶液P4，温和混匀后室温静置10分钟，随后12,000 rpm离心10分钟。

6. 过滤除杂：将离心上清分次转移至过滤柱CS中，12,000 rpm离心2分钟，收集滤液。

7. 结合准备：向滤液中加入0.3倍体积的异丙醇，混匀后转移至已平衡的吸附柱CP4中。

8. 吸附：12,000 rpm离心1分钟，使DNA结合至膜上，弃废液。

9. 去蛋白：向吸附柱中加入500 µL去蛋白液PD，12,000 rpm离心1分钟后弃废液。

10. 漂洗I：加入600 µL漂洗液PW，12,000 rpm离心1分钟后弃废液。

11. 漂洗II：重复加入600 µL漂洗液PW并离心，以彻底去除残留杂质。

12. 干燥：将空柱放回收集管，12,000 rpm离心2分钟以去除残余乙醇。

13. 洗脱：将吸附柱置于新离心管中，向膜中央悬空滴加100-300 µL洗脱缓冲液TB，室温静置2分钟后离心收集DNA。

五、注意事项

1. 试剂准备：使用前需将RNase A加入溶液P1中，混匀后于2-8°C保存；首次使用前按说明向漂洗液PW中加入指定体积的无水乙醇。

2. 溶液状态：使用前检查平衡液BL、溶液P2和P4，若出现浑浊，可于37°C水浴加热至澄清。

3. 安全操作：避免皮肤直接接触溶液P2和P4，使用后立即盖紧瓶盖。

4. 离心条件：所有离心步骤均在室温下以12,000 rpm的转速进行。

5. 得率优化：对于低拷贝数或大片段（>10 kb）质粒，建议增加起始菌液量并按比例增加P1、P2、P4用量。

6. 吸附柱处理：实验前用平衡液处理吸附柱可激活硅胶膜，提高DNA结合效率。

7. 时效性：经平衡液处理后的吸附柱建议当日使用，以确保最佳纯化效果。

六、相关产品推荐

1. 快速质粒小提试剂盒（货号：DP105）：适用于常规分子生物学实验的快速质粒DNA提取。

2. 无内毒素质粒大提试剂盒（货号：DP117）：适用于从大量细菌培养物中制备高纯度、低内毒素质粒DNA。

3. 无内毒素质粒中量提取试剂盒（货号：DP108）：可用于从 20-50 ml 菌液中提取质粒。