一、基本信息

产品编号：TD421-2/TD421-10/TD421-20

核心特点：快速提取、高纯度、极低内毒素、可视化中和

产品描述：本试剂盒专为从大量细菌培养物中快速高效提取高纯度、极低内毒素质粒DNA而设计。采用优化的碱裂解法结合独特的硅胶膜纯化柱与内毒素去除柱，无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂或乙醇沉淀，可在约25分钟内完成操作。提取的质粒DNA内毒素含量≤0.1 EU/µg，适用于各类对核酸纯度要求严格的敏感下游应用。

二、产品应用

本产品适用于从150ml高密度细菌培养物中快速提取高纯度质粒DNA，尤其适合对低内毒素水平有要求的应用。

△酶切与连接：可直接用于限制性内切酶消化及后续连接反应。

△转化与转染：适用于细菌转化及多种真核细胞的转染实验。

△PCR扩增：可作为高质量模板用于聚合酶链式反应。

△核酸测序：满足Sanger测序或下一代测序对模板纯度的要求。

△体外转录：适用于mRNA合成等体外转录反应。

三、产品优势

✅高纯度：提取的质粒DNA A260/A280比值通常≥1.8，A260/A230比值≥2.0，蛋白质、盐分及RNA残留极低。

✅低内毒素：通过专有的内毒素去除柱处理，最终产物内毒素含量≤0.1 EU/µg。

✅高产稳定：每次处理可获得高达约800µg的质粒DNA，产量稳定，重复性好。

✅快速高效：整个操作流程可在25分钟内完成，无需乙醇沉淀等繁琐步骤。

✅操作可视：裂解中和过程伴随明显的颜色变化和沉淀形成，便于直观判断反应终点。

✅安全环保：避免使用苯酚、氯仿等有毒有害有机溶剂。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 菌体收集：取150ml OD600约为5的过夜培养菌液，经离心后彻底弃去上清，收集细菌沉淀。

2. 重悬菌体：使用溶液P1充分重悬菌体沉淀，确保无可见菌块。

3. 碱裂解：加入溶液P2，温和上下颠倒混匀以裂解细胞，室温静置不超过5分钟。

4. 中和沉淀：加入预冷的溶液P3，温和混匀直至溶液变为黄色并出现均匀絮状沉淀，随后离心收集上清。

5. 澄清过滤：使用提供的注射器装置对含质粒的上清液进行初步过滤澄清。

6. 沉淀浓缩：向过滤液中加入预冷异丙醇，混匀以沉淀核酸。

7. 结合洗涤：将混合液转入纯化柱，依次使用洗涤液1和洗涤液2进行清洗。

8. 洗脱收集：使用预热至65-70℃的洗脱液将DNA从纯化柱上洗脱下来。

9. 去除内毒素：将洗脱液过内毒素去除柱，离心收集最终纯化的质粒DNA。

五、注意事项

1. 试剂储存：溶液P1加入RNaseA后需于4℃保存；溶液P2应室温避光保存，低温析出时需37℃水浴复溶，勿剧烈摇晃。

2. 溶液配制：首次使用前，需按瓶身说明向质粒DNA洗涤液2中加入指定体积的无水乙醇。

3. 菌液要求：推荐使用OD600≤5的菌液进行提取，过高的菌体量将影响裂解效率及最终产物的内毒素水平。

4. 操作轻柔：裂解与中和步骤需温和混匀，避免剧烈振荡导致基因组DNA污染或质粒损伤。

5. 离心条件：请严格遵循各步骤推荐的离心力和时间，确保沉淀完全和液体彻底去除。

6. 安全防护：操作时应穿戴实验服、手套及护目镜，在通风良好的环境下进行。

六、相关产品推荐

1. 质粒小量提取试剂盒（货号：TD428）：用于从1-3ml细菌培养物中快速提取质粒DNA，适用于克隆筛选与鉴定。

2. 质粒中量提取试剂盒（货号：TD420）：适用于从50ml细菌培养物中提取质粒DNA，平衡产量与时间成本。

3. 通用基因组DNA小量提取试剂盒（货号：TD468）：用于从细菌、动物组织或细胞中高效提取高分子量基因组DNA。