一、基本信息

产品编号：TD427-100/TD427-200/TD427-400

核心特点：快速提取、高纯度、可视化监测、低内毒素

产品描述：本产品是一种基于碱裂解法和硅胶膜纯化技术的质粒DNA小量提取试剂盒，适用于从1-5 mL细菌培养物中快速纯化高纯度质粒DNA。其独特的显色指示系统可直观监测裂解中和过程，操作流程无需苯酚、氯仿等有毒试剂或乙醇沉淀，可在约15分钟内完成提取，所得质粒DNA内毒素含量低，可直接用于多种下游分子生物学应用。

二、产品应用

本质粒DNA超快速小量提取试剂盒适用于从大肠杆菌培养物中纯化质粒DNA，适用于多种分子生物学实验。

△酶切与连接：为限制性内切酶消化和连接反应提供高纯度模板。

△转化与克隆：纯化的质粒可直接用于感受态细胞的转化，进行克隆筛选。

△PCR扩增：作为高保真PCR或常规PCR的优质模板。

△测序分析：提供高纯度DNA，确保测序反应准确性和读长。

△体外转录：适用于需要高纯度质粒DNA作为模板的体外转录实验。

△细胞转染：低内毒素水平的质粒DNA适用于哺乳动物细胞的转染实验。

三、产品优势

✅快速高效：整个提取流程可在约15分钟内完成，显著提升实验效率。

✅高纯度：提取的质粒DNA A260/A280比值通常≥1.8，A260/A230比值≥2.0，内毒素含量低于1 EU/μg。

✅操作安全：无需使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂，实验过程更安全环保。

✅可视化监测：独特的显色反应（红变黄）可直观判断细胞裂解与中和是否完全，减少操作失误。

✅广泛兼容：可有效提取大小高达25 kb的质粒DNA，并兼容后续多种分子生物学应用。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 菌体收集：取1-5 mL过夜培养的菌液（OD600建议≤5），离心收集菌体沉淀。

2. 重悬：使用溶液P1充分重悬菌体沉淀，确保无可见菌块。

3. 裂解：加入溶液P2，温和颠倒混匀至溶液变得清亮粘稠，室温静置不超过5分钟。

4. 中和：加入预冷的溶液P3，立即温和颠倒混匀直至溶液由红色完全转变为黄色并出现絮状沉淀。

5. 澄清：将裂解混合物高速离心，取上清液转移至新管。

6. 结合：将上清液转移至2号PX纯化柱，通过离心或负压使DNA结合至硅胶膜。

7. 洗涤：依次使用质粒DNA洗涤液1和已添加乙醇的洗涤液2洗涤纯化柱。

8. 干燥：高速空转离心纯化柱以彻底去除残留乙醇。

9. 洗脱：向膜中央加入预热的洗脱液，静置后离心收集高纯度质粒DNA。

五、注意事项

1. 试剂保存：溶液P1加入RNase A后需于2-8℃保存；溶液P2应室温保存，若出现SDS沉淀，可于37℃水浴加热至澄清。

2. 溶液配制：首次使用前，需按说明书将指定体积的95%乙醇加入质粒DNA洗涤液2中，并做好标记。

3. 菌量控制：使用OD600≤5的菌液可获得最佳得率，菌量过大会导致裂解不完全或纯化柱堵塞。

4. 操作轻柔：裂解（加P2）与中和（加P3）步骤需温和混匀，避免剧烈振荡导致基因组DNA污染或质粒损伤。

5. 时间控制：菌体在裂解液（P2）中的暴露时间不宜超过5分钟，以防质粒变性。

6. 安全防护：操作时需佩戴手套、护目镜等个人防护装备，并在通风良好的环境中进行。

六、相关产品推荐

1. 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（货号：TD408）：用于从琼脂糖凝胶中高效回收特定大小的DNA片段。

2. 通用基因组DNA小量提取试剂盒（货号：TD468）：专门用于从各类生物样本中快速提取高质量基因组DNA。

3. 病毒DNA/RNA提取试剂盒（货号：TD720）：适用于从血清、血浆或细胞培养上清中纯化病毒核酸。

4. 快速DNA微量提取试剂盒（货号：TD3020）：针对低起始量或微量DNA样本进行高效纯化与浓缩。