一、基本信息

产品编号：TD435-PLUS-10/TD435-PLUS-50/TD435-PLUS-200

核心特点：高效去内毒素、操作便捷、高纯度、高产量

产品描述：本试剂盒专为从5-15ml细菌培养物中快速提取高纯度、低内毒素含量的质粒DNA而设计。其采用独特的显色指示和优化的内毒素去除方案，无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂或乙醇沉淀步骤，可在约30分钟内获得适用于转染、酶切、测序等多种下游分子生物学实验的高质量质粒。

二、产品应用

本试剂盒提取的质粒DNA适用于多种对核酸纯度及内毒素含量敏感的分子生物学实验。

△酶切与连接：可直接用于限制性内切酶消化及连接反应。

△PCR扩增：作为高保真PCR的模板，可获得特异性扩增产物。

△体外转录：适用于需要高纯度DNA模板的体外转录系统。

△DNA测序：满足Sanger测序或下一代测序对模板纯度的要求。

△细胞转染：低内毒素特性使其适用于哺乳动物细胞的瞬时或稳定转染。

△体内实验：纯化后的质粒可用于动物水平的基因递送研究。

三、产品优势

✅高效去内毒素：采用专业内毒素去除液，可有效吸附并去除内毒素，含量可低至≤0.05 EU/μg。

✅操作直观便捷：独特的红色显色反应，便于实时监控菌体重悬与裂解状态，简化操作判断。

✅高纯度与高产量：纯化流程优化，可获得高纯度质粒，产量通常≥200μg，A260/A280比值≥1.8。

✅安全环保：实验过程无需使用苯酚、氯仿等有毒有机溶剂，实验环境更安全。

✅广泛兼容性：提取的质粒DNA大小最高可达25kb，适用于广泛的分子克隆载体。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 菌体收集：离心5-15ml过夜培养的菌液，弃上清，收集细菌沉淀。

2. 菌体重悬：向沉淀中加入溶液P1，充分吹打或涡旋至菌体完全悬浮，溶液呈均匀红色。

3. 碱裂解：加入溶液P2，温和颠倒混匀，室温静置5分钟以充分裂解细胞。

4. 中和反应：加入溶液P4，立即温和颠倒混匀至形成絮状沉淀。

5. 内毒素去除：将裂解混合液转移至含内毒素去除液的离心管中，充分混匀。

6. 过滤澄清：将混合液通过试剂盒提供的漏斗注入纯化柱，依靠重力或负压使溶液滤过。

7. 柱膜洗涤：依次使用质粒DNA预洗液和已添加乙醇的Endo-Free洗涤液过柱洗涤。

8. 质粒洗脱：将纯化柱置于洁净离心管上，加入无酶水，静置后离心洗脱得到质粒DNA。

五、注意事项

1. 无菌操作：建议在超净工作台内操作，所用耗材及移液器需经灭菌或去内毒素处理，防止外源污染。

2. 溶液储存：内毒素去除液须于4℃保存，使用前混匀；溶液P2若出现沉淀，可于37℃水浴促溶，避免剧烈摇晃。

3. 菌量控制：处理菌液OD600值建议控制在2-3之间，菌体过多可能导致裂解不彻底、RNA残留及内毒素超标。

4. 安全防护：溶液P4含刺激性成分，操作时应佩戴手套，避免接触皮肤或眼睛。

5. 试剂配制：首次使用前需将RNase A加入溶液P1中；洗涤液中的乙醇应现用现加，以防挥发。

六、相关产品推荐

1. 质粒小量提取试剂盒（货号：TD428）：用于从1-3ml细菌培养物中快速提取质粒DNA，适用于克隆筛选与鉴定。

2. 质粒中量提取试剂盒（货号：TD420）：适用于从50ml细菌培养物中提取质粒DNA，平衡产量与时间成本。