一、基本信息

产品名称：ReverTra Ace™ qPCR RT Master Mix

产品货号：FSQ-201 (200次反应) / FSQ-201S (40次反应)

规格：FSQ-201包含5x RT Master Mix 400 µL， 5x RT Master Mix no RT-Control 40 µL， Nuclease-free water 2 x 1000 µL； FSQ-201S包含5x RT Master Mix 80 µL， 5x RT Master Mix no RT-Control 8 µL， Nuclease-free water 400 µL

保存温度：-20°C， 长期储存推荐-30°C

二、产品介绍

ReverTra Ace™ qPCR RT Master Mix是一种5倍浓度的预混液，专为高效合成适用于实时荧光定量PCR（qPCR）的高质量cDNA而设计。该预混液包含经过突变的M-MLV逆转录酶ReverTra Ace™、优化的缓冲液、dNTPs、MgCl₂、RNase抑制剂以及随机引物和Oligo dT引物。其优化的反应体系允许在15分钟内完成逆转录反应，且合成的cDNA产物兼容下游qPCR，无需额外的RNA去除步骤。

三、产品应用

ReverTra Ace™ qPCR RT Master Mix主要用于将RNA模板逆转录为cDNA，以用于后续的实时荧光定量PCR分析。

△基因表达分析：用于检测mRNA的表达水平。

△低丰度RNA检测：优化的体系适合检测痕量mRNA。

△快速cDNA合成：适用于需要快速完成逆转录反应的实验流程。

△无逆转录对照：提供专用的no-RT Control预混液，用于排除基因组DNA污染造成的假阳性。

四、产品优势

✅高效快速：采用高效的ReverTra Ace™逆转录酶，标准反应时间仅需15分钟。

✅操作简便：5倍预混液包含了除模板RNA和水之外的所有反应组分，简化了加样步骤。

✅兼容性佳：优化的缓冲液体系允许将高达20%体积的cDNA产物直接加入qPCR体系，而不抑制PCR反应。

✅高灵敏度：预混的随机与Oligo dT引物组合，可高效逆转录包括低丰度mRNA在内的广泛RNA模板。

✅温度稳定：ReverTra Ace™酶在高达50°C的温度下仍保持高活性，有助于打开RNA二级结构，提高复杂模板的逆转录效率。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 模板准备：推荐使用高质量的总RNA或mRNA作为模板。若总RNA含有基因组DNA污染，建议在逆转录前进行DNase I处理。

2. 体系配制：在冰上按顺序加入无核酸酶水、RNA模板和5x RT Master Mix，使总体积为10 µL，RNA模板量建议在1 pg至1 µg之间。

3. 逆转录反应：将反应体系置于PCR仪中，于37°C孵育15分钟。对于具有复杂二级结构的RNA模板，可增加一个50°C孵育5分钟的步骤。

4. 酶失活：将反应体系于98°C加热5分钟，以灭活逆转录酶。

5. 产物保存：反应结束后，可将cDNA产物置于4°C短期保存或-20°C长期保存，并可直接稀释用于后续qPCR。

六、注意事项

1. 储存条件：所有组分应储存于-20°C，避免反复冻融，以保证酶活性与试剂稳定性。

2. RNA质量：RNA模板的纯度与完整性是获得理想结果的关键，降解或污染的RNA会严重影响cDNA合成效率。

3. 无酶对照：为确认结果特异性，每次实验应设立使用“5x RT Master Mix no-RT Control”的无逆转录酶对照。

4. 基因组DNA：若使用总RNA且qPCR引物跨外显子连接区，建议在逆转录前对RNA进行DNase I消化，以消除基因组DNA干扰。

5. 加样体积：在下游qPCR中，cDNA产物的添加体积建议不超过总反应体积的20%，以避免潜在的PCR抑制。

七、相关产品推荐

1. ReverTra Ace™ 高效逆转录酶（货号：TRT-101）

2. RNase抑制剂（重组型）（货号：SIN-201）

3. THUNDERBIRD™ Probe qPCR Mix（货号：QPS-101）

4. THUNDERBIRD™ SYBR® qPCR Mix（货号：QPS-201）

5. ReverTra Ace™ qPCR RT Kit（货号：FSQ-101）

6. ReverTra Ace™ qPCR RT Master Mix with gDNA remover（货号：FSQ-301）