一、基本信息

产品名称：重组人鼻病毒14型3C蛋白酶

产品货号：7360

规格：500 U

保存温度：-20℃

二、产品介绍

本品为来源于大肠杆菌表达、N端带有6×HN标签的高纯度重组人鼻病毒14型3C蛋白酶。该酶具有与天然蛋白酶相同的底物特异性，可高效识别并切割氨基酸序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro，用于切除含有该识别位点的融合蛋白标签。其N端6×HN标签便于后续通过固定化金属亲和层析方法去除，且该酶在4℃条件下仍保持活性，适用于对温度敏感的蛋白质样品处理。

三、产品应用

HRV 3C蛋白酶主要用于从融合蛋白中去除标签，以获得无标签的目的蛋白。

△融合蛋白标签切除：特异性切除含有HRV 3C蛋白酶识别位点的融合蛋白标签，如TF、ProS2、GST等。

△无标签蛋白制备：与兼容的表达载体（如pCold系列）联用，用于生产无标签的重组蛋白。

△蛋白纯化流程整合：酶切反应后，可利用其自身的6×HN标签，通过IMAC层析一步去除酶和游离的标签，简化纯化步骤。

四、产品优势

✅高特异性：严格识别并切割Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro序列，对非目标序列无切割活性，保证目的蛋白完整性。

✅易于去除：酶分子N端融合6×HN标签，可通过固定化金属亲和层析（IMAC）高效、便捷地从反应体系中分离。

✅低温活性：在4℃条件下仍具有高效催化活性，适用于在低温环境下操作以维持对温度敏感的目的蛋白的稳定性和活性。

✅质量控制：产品提供切割对照融合蛋白，可用于验证每批次的酶活性及切割效率，确保实验结果可靠。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配置：将待切割的融合蛋白样品、10×切割缓冲液、HRV 3C蛋白酶及去离子水按推荐比例混合，配制反应体系。

2. 酶切反应：将反应体系置于4℃孵育，通常建议孵育16小时以完成高效切割。

3. 酶去除：反应结束后，向混合液中加入适量的固定化金属亲和层析树脂（如TALON树脂），温和混匀以结合带有6×HN标签的蛋白酶及游离的标签蛋白。

4. 分离纯化：通过离心或重力柱过滤收集上清液或流穿液，其中即含有已切除标签的目的蛋白。

5. 结果验证：取纯化前后的样品进行SDS-PAGE电泳分析，验证标签切除效果及目的蛋白纯度。

六、注意事项

1. 保存条件：本品应始终保存于-20℃，避免反复冻融，建议分装保存以维持酶活性稳定。

2. 缓冲体系：酶切反应需在提供的专用切割缓冲液或成分相当的缓冲体系中进行，不适宜的pH或离子强度可能影响切割效率。

3. 底物比例：建议根据预实验优化酶与底物的比例，过量的酶可能导致非特异性切割，而酶量不足则会导致切割不完全。

4. 去除验证：使用IMAC树脂去除蛋白酶后，建议通过电泳等方法验证蛋白酶是否已完全去除，以防残留酶影响下游应用。

5. 对照使用：建议在每次实验中同时设置以切割对照融合蛋白为底物的阳性对照反应，以确认酶活性正常。

七、相关产品推荐

1. pCold™ TF DNA表达载体（货号：3365）

2. pCold™ ProS2 DNA表达载体（货号：3371）

3. pCold™ GST DNA表达载体（货号：3372）