一、基本信息

产品编号：G592

核心特点：即用型、基因组DNA去除、高效合成、高兼容性

产品描述：本产品为5X浓度的即用型预混液，专为第一链cDNA合成设计，并整合了基因组DNA去除功能。其优化的配方包含热稳定性逆转录酶、RNase抑制剂、温度敏感型DNase、dNTPs以及特定比例的Oligo(dT)与随机引物，可在去除gDNA污染的同时高效、稳定地合成高质量cDNA，适用于多种下游应用。

二、产品应用

All-In-One 5X RT MasterMix with gDNA Removal适用于需要进行高灵敏度、高特异性逆转录反应的研究。

△实时荧光定量PCR（qPCR）：为基因表达分析提供无gDNA污染的cDNA模板。

△数字PCR（dPCR）：确保绝对定量分析中模板的纯净度与准确性。

△常规PCR扩增：为终点法PCR提供高质量的cDNA起始材料。

△cDNA文库构建：为高通量测序等应用合成兼容性良好的第一链cDNA。

三、产品优势

✅集成高效：单管预混液整合了gDNA去除与逆转录反应，简化操作流程，减少污染风险。

✅高特异性：内置温度敏感型DNase可有效降解基因组DNA，避免其对RNA检测的干扰，确保结果准确性。

✅合成高效：采用优化的热稳定性逆转录酶与引物系统，确保从低至1 ng的RNA起始量中获得高产率、全长及近全长的cDNA。

✅兼容性强：适用于总RNA或poly(A)+ mRNA模板，并对下游多种应用如qPCR、测序等具有良好兼容性。

✅结果稳定：配方经过精密优化，提供可靠且重复性高的cDNA合成效果。

四、使用说明（实验流程概要）

1. 准备：使用前将所有组分完全解冻并混匀，在冰上配制反应体系。

2. 混合：轻柔混匀反应液，并进行短暂离心以收集管壁液滴。

3. 孵育：将反应管置于37°C孵育15分钟，随后转移至60°C孵育10分钟。

4. 终止（可选）：将反应管于95°C加热3分钟以灭活酶活性，随后置于冰上冷却。

五、注意事项

1. 模板质量：推荐使用高纯度、完整性好的RNA样本，poly(A)+ mRNA通常能获得更高的cDNA产量和纯度。

2. gDNA去除：若需更彻底的gDNA去除效果，可将37°C孵育时间延长至30分钟。

3. 长片段合成：针对较长转录本的逆转录，可将60°C孵育时间延长至30分钟。

4. 产物保存：新合成的第一链cDNA可立即用于下游实验，或于-20°C长期保存。

5. 替代选择：若使用的RNA样本纯度极高且无需去除gDNA，可选用不含gDNA去除功能的OneScript® Hot 5X RT MasterMix以获得更快的实验流程。

六、相关产品推荐

1.  OneScript® Hot 5X RT MasterMix（货号：G590）：适用于无需去除gDNA的高纯度RNA样本，提供更快速高效的cDNA合成方案。