一、基本信息

产品名称：Pierce™ ECL Western Blotting Substrate

产品货号：32109 / 32209 / 32106

规格：50 mL / 250 mL / 500 mL

二、产品介绍

Thermo Scientific™ Pierce™ ECL Western Blotting Substrate是一种基于鲁米诺增强型化学发光底物，用于检测免疫印迹膜上的辣根过氧化物酶（HRP）标记物。该产品能够检测皮克级别的抗原，反应产生持续数小时的化学发光信号，可通过X光胶片或成像系统进行捕获。通过优化一抗和二抗的稀释度，可获得最佳的信号强度和持续时间。

三、产品应用

Pierce™ ECL Western Blotting Substrate主要用于基于辣根过氧化物酶（HRP）的免疫印迹检测。

△蛋白质免疫印迹（Western Blot）：用于检测经SDS-PAGE分离并转印至膜上的目标蛋白。

△高丰度蛋白检测：适用于样品中表达量较高的目标蛋白的检测。

△常规免疫印迹分析：在标准实验条件下，对丰度适中的蛋白靶标进行定性或半定量分析。

四、产品优势

✅高灵敏度：能够检测低至皮克级别的抗原，满足大多数常规检测需求。

✅信号持久：产生的化学发光信号持续时间可达1-2小时，为成像提供了充足的时间窗口。

✅操作简便：试剂为即用型溶液，仅需等体积混合即可制备工作液，流程标准化。

✅兼容性强：信号可通过传统的X光胶片或现代CCD成像系统进行捕获，适用性广。

五、使用说明（实验流程概要）

1 膜洗涤：蛋白质转印后，将膜从转印装置中取出，使用去离子水在摇床上洗涤5分钟，以彻底去除转印缓冲液。

2 封闭：使用合适的封闭试剂（如StartingBlock™ PBS封闭缓冲液）在室温摇床上封闭膜30-60分钟，以阻断非特异性结合位点。

3 一抗孵育：将膜与含有10%封闭液的一抗工作液在室温摇床上孵育1小时，或根据需要在2-8°C孵育过夜。

4 洗涤（一抗后）：使用含有0.05% Tween 20的TBS或PBS等洗涤缓冲液，在摇床上洗涤膜3次，每次10分钟。

5 二抗孵育：将膜与HRP标记的二抗工作液在室温摇床上孵育30分钟至1小时。

6 洗涤（二抗后）：使用洗涤缓冲液彻底洗涤膜6次，每次5分钟，以去除未结合的HRP标记二抗。

7 底物配制：将Detection Reagent 1和Detection Reagent 2等体积混合（例如，对于小型膜，各取5 mL混合），配制工作液，需确保足以完全浸湿膜。

8 底物孵育：将膜与新鲜配制的底物工作液孵育1分钟。

9 成像：将膜从底物中取出，用塑料膜包裹并去除气泡后，立即使用成像系统或X光胶片进行曝光检测。

六、注意事项

1 优化实验：为获得最佳结果，需对样品量、抗体浓度、孵育时间等变量进行系统性优化。

2 避免抑制剂：所有缓冲液中不得含有叠氮化钠，因其会抑制HRP酶活性。

3 防止膜干燥：在整个操作过程中，需使用足量溶液，确保膜始终保持湿润状态。

4 操作器具：操作膜时需佩戴手套或使用洁净的塑料镊子，避免使用有锈迹的金属器具，以防产生斑点或高背景。

5 底物稳定性：底物工作液在室温下仅稳定1小时，需现配现用，并避免阳光直射。

6 适用性声明：本产品仅限用于科学研究，不适用于诊断程序。

七、相关产品推荐

1 StartingBlock™ Blocking Buffer（货号：37538）

2 SuperSignal™ West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate（货号：34580）

3 SuperSignal™ West Dura Extended Duration Substrate（货号：37071）

4 SuperSignal™ Western Blot Enhancer（货号：46640）