一、基本信息
产品名称:Cell Lysis Buffer (10X)
产品货号:9803S
规格:15 ml
保存温度:-20°C
二、产品介绍
本产品是一种10倍浓缩的非变性细胞裂解液,适用于在非变性条件下裂解细胞,以获取具有生物活性的蛋白样品。其配方包含Tris-HCl、NaCl、去垢剂及多种蛋白酶与磷酸酶抑制剂,旨在有效裂解细胞并维持目标蛋白的天然构象与功能。本品仅供科研使用。
三、产品应用
本产品适用于多种基于细胞或组织蛋白提取的后续实验分析。
△Western Blot:用于蛋白质印迹分析的样品制备
△免疫沉淀:用于免疫共沉淀实验的细胞裂解
△免疫组织化学:为免疫组化实验提供蛋白提取物
△染色质免疫沉淀:用于ChIP实验的细胞核蛋白提取
△免疫荧光:适用于免疫荧光检测的样品前处理
△流式细胞术:用于流式细胞分析相关的胞内蛋白检测
△ELISA-多肽:为ELISA检测提供蛋白样品
四、产品优势
✅配方全面:包含Tris缓冲体系、离子强度调节剂、去垢剂及多种蛋白酶与磷酸酶抑制剂,提供全面的裂解与保护环境。
✅兼容广泛:适用于人、小鼠、大鼠等多种物种来源的细胞及组织样本的裂解。
✅操作灵活:可根据实验需求,在1X工作液中方便地添加额外的蛋白酶抑制剂。
✅稳定可靠:10X储存液在-20°C下可稳定保存长达24个月,方便长期使用。
五、使用说明(实验流程概要)
1. 储存与解冻:将10X原液于-20°C储存,使用前于室温(24-30°C)解冻并混匀。
2. 稀释配制:使用去离子水将10X原液稀释为1X工作液,本产品可配制总计150 ml工作液。
3. 预冷与添加:将1X工作液置于冰上预冷,使用前立即加入1 mM PMSF。
4. 细胞处理:对于贴壁细胞,用PBS洗涤后,按每10 cm培养皿加入400 µL预冷的1X裂解液。
5. 冰上裂解:将培养皿置于冰上孵育5分钟,使裂解液充分作用。
6. 收集与超声:刮下细胞,对细胞悬液进行短暂超声处理以剪切DNA。
7. 离心分离:于4°C,14,000 x g离心10分钟,以去除细胞碎片。
8. 上清收集:小心吸取上清液,即为全细胞蛋白提取物,用于后续实验。
六、注意事项
1. 储存:10X原液长期保存应置于-20°C,短期(1-2周)使用可存放于4°C,建议分装以避免反复冻融。
2. 沉淀处理:10X原液因浓度高可能出现沉淀,建议于37°C水浴加热15分钟并混匀,或稀释至5X以上浓度后加热处理以溶解沉淀。
3. 组织样本:用于组织裂解时,建议按100 mg组织对应1 ml裂解液的比例,并在加液后进行机械匀浆步骤。
4. 非贴壁细胞:处理悬浮细胞时,需先用PBS洗涤并离心收集细胞,再按每10^7个细胞加入400 µL裂解液进行操作。
5. 使用限制:本品仅供科学研究用途,不适用于临床诊断。
七、相关产品推荐
1. 磷酸酶抑制剂混合物(货号:5870)
2. 蛋白酶抑制剂混合物(货号:5871)
3. RIPA裂解缓冲液(10×)(货号:9806)