一、基本信息                                                             
  产品编号：R3133 (提供 S / M / L 三种规格)
  类型：高保真 (High-Fidelity, HF®) 限制性内切酶
  识别序列：5' - A**CTAGT - 3'
  切割特性：产生 5' CTAG 粘性末端
  来源：克隆并修饰自 Sphaerotilus species (ATCC 13923) 的 SpeI 基因，在 E. coli 中重组表达。
  单位定义：在 50 μl 总反应体系中，37°C 条件下，1 小时完全消化 1 μg pXba-XbaI DNA 所需的酶量。
  储存条件：-20°C
  运输条件：冰袋运输

  产品组成：

· SpeI-HF® 酶液

· rCutSmart™ Buffer (10X)

· Gel Loading Dye, Purple (6X) (紫色凝胶上样染料

二、产品应用                                                             

SpeI-HF® 是一种经过工程改造的高保真限制酶，专为需要极高特异性的分子生物学实验设计。

· 分子克隆：用于质粒、BAC、PAC 或其他载体的精确DNA切割。

· DNA组装：特别适用于 BioBrick® 标准组装，其产生的粘性末端（5'-CTAG）可与 AvrII, NheI, XbaI 等酶切产物高效连接。

· 基因图谱构建：用于DNA片段的限制性酶切分析和图谱绘制。

· 诊断检测：在分子诊断中用于特定DNA序列的识别和切割。

三、产品优势 (HF® 系列特点)                                                                                                                                                            

1. 极低星号活性：

经过工程化改造，在推荐缓冲液 (rCutSmart™ Buffer) 中表现出显著降低的星号活性，确保切割的高度特异性，减少非预期切割。

2. 单缓冲液系统：

在 rCutSmart™ Buffer 中具有 100% 活性，简化了双酶切或多酶切的实验设计。

3. 快速高效：

属于 Time-Saver™ 认证酶，可在 5-15 分钟内 完成消化，同时也支持过夜消化而不会引起DNA降解。

4. 无动物源成分：

反应缓冲液已不含BSA，全部替换为重组白蛋白 (Recombinant Albumin, rAlbumin)，降低了外源因子污染的风险，符合更高标准的生物安全性要求。

5. 即用型预混染料：

产品附带紫色6倍上样染料，含有两种示踪染料，便于直接上样进行琼脂糖凝胶电泳，无需额外配制。

6. 卓越的纯度与质量：

NEB 对所有酶制剂进行严格的质量控制，确保无外切核酸酶和内切核酸酶污染。

四、使用说明                                                             

1. 标准反应体系 (以消化 1 μg DNA 为例)：

2. 反应条件：

· 温度：37°C

· 时间：5-15 分钟 (Time-Saver) 或 常规 1 小时，亦可过夜消化。

五、操作流程                                                             

在冰上按上表配置反应体系，轻柔混匀。

短暂离心收集管壁液滴。

置于 37°C 孵育所需时间。

加入 5-10 μl 6X 紫色上样染料 (已提供) 即可直接进行琼脂糖凝胶电泳分析，或通过 80°C 加热 20 分钟 来终止反应。

双酶切：如果另一种酶也在 rCutSmart™ Buffer 中具有 100% 活性，则可直接进行双酶切。否则，请参考 NEB 官方网站的缓冲液活性表或使用 NEBcloner 工具进行设计。

六、注意事项                                                             

1. 储存：

请在 -20°C 下储存酶制剂，避免反复冻融。反应缓冲液和上样染料可于 4°C 或 -20°C 储存。

3. 稀释：

如需稀释酶液，请使用专用的 Diluent C，以保持酶的稳定性。

4. 甲基化敏感性：

SpeI-HF® 不敏感于 dam, dcm 或 CpG 甲基化。

5. 末端切割：

切割位点非常靠近 DNA 末端（小于 10 bp）可能会影响切割效率，需酌情增加酶量或延长反应时间。

6. 星号活性：

尽管星号活性已大幅降低，但仍需避免极端非理想条件，如过高pH、高甘油浓度 (>5%)、过高酶量等。

7. 无菌操作：

如需进行后续克隆实验，请确保使用无菌试剂和无菌操作技术。

七、相关产品推荐                                                          

1. rCutSmart™ Buffer (B6004)：单独购买的通用缓冲液。

2. NEB 5-alpha 高效感受态细胞 (C2987)：用于酶切后产物的高效克隆。

3. Quick-Load® Purple 1 kb Plus DNA Ladder (N0550)：预染DNA分子量标准，可与提供的上样染料配合使用。

4. 同尾酶/配套酶：

AvrII (R0174)：识别序列 C**CTAGG，产生兼容末端。

NheI-HF® (R3131)：识别序列 G**CTAGC，产生兼容末端。

XbaI (R0145)：识别序列 T**CTAGA，产生兼容末端。

5. T4 DNA Ligase (M0202)：用于酶切后DNA片段的连接。