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一、基本信息
产品编号：SN3104 (提供 S/M/L 三种规格)
分离方法：阴性分选 (Negative Selection)，无柱磁极分离法
分离目标：从人外周血单个核细胞 (PBMC) 中高纯度分离 初始/纯真CD4 T细胞 (Naive CD4+ T Cells, CD45RA+CD45RO-)
核心组分：
EasyIso™ Human Naive CD4 T Cell Isolation Cocktail：生物素偶联的抗体混合物，用于标记非目标细胞。
EasyIso™ Streptavidin Nanobeads：链霉亲和素纳米磁珠，用于结合被标记的非目标细胞。
保存条件：4°C 保存，避免冷冻。
运输条件：4°C 运输。
二、产品应用
本试剂盒专门用于从健康人或患者的外周血中快速、高效地分离出处于最原始状态的Naive CD4 T细胞。分离后的细胞可直接用于多种下游应用：
· 免疫学研究：研究T细胞活化、分化、耐受和免疫应答的起始机制。
· 细胞治疗：为CAR-T、TCR-T等过继性细胞免疫疗法提供高质量的初始T细胞来源。
· 药物研发与筛选：评估药物或候选化合物对初始T细胞功能的影响。
· 功能实验：体外刺激、增殖、细胞因子分泌检测等。
· 流式细胞术分析：获得高纯度的细胞群体，用于更精准的表型分析。
三、产品优势
1. 超高纯度：
采用高效的抗体混合物，分选后Naive CD4 T细胞纯度最高可达95%以上（如展示数据纯度达96.8%）。
2. 保持细胞原始状态：
采用阴性分选策略，抗体和磁珠不会直接接触或结合目标Naive CD4 T细胞，最大限度地保持了细胞的天然活性和未受刺激的状态，不影响后续功能实验。
3. 快速高效：
整个分离流程仅需18-20分钟，远超基于柱子的分选方法，极大提高了实验效率。
4. 操作简便：
无需昂贵的流式细胞分选仪 (FACS)，仅需普通磁力架即可完成，无需过柱，避免了柱子的堵塞风险和细胞损失。
5. 即拿即用：
分离后的细胞存在于缓冲液中，可直接用于培养、分析或后续实验，无需进行复杂的磁珠酶解或去除步骤。
四、使用说明（操作步骤概要）
所需自备设备与试剂：离心机、磁力架（单孔或联排）、70 μm无菌细胞滤网、FACS Buffer (1x PBS + 0.02% EDTA + 2% FBS)、无菌离心管。
1. 制备细胞：
将准备好的人PBMC重悬于FACS Buffer中，浓度为 1 x 10^8 cells/mL。
o 建议：使用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法制备PBMC，而非红细胞裂解液。
2. 标记非目标细胞：
每mL细胞悬液中加入 100 μL 的 Isolation Cocktail。轻轻混匀，室温孵育10分钟。
3. 连接磁珠：
震荡重悬 Streptavidin Nanobeads 30秒。每mL上述细胞悬液中加入 100 μL 磁珠。轻轻混匀，室温孵育5分钟。
4. 稀释样品：
向孵育后的细胞悬液中加入FACS Buffer进行稀释。
o 若使用5 mL流式管，则稀释至总体积 2.5 mL。
o 若使用15 mL离心管，则稀释至总体积 7.5 mL。
5. 磁性分离：
将样品管置于磁力架上。
o 单孔磁力架：吸附 3分钟。
o 联排磁力架：吸附 5分钟。
6. 收集目标细胞：
倾斜磁力架，将富含未标记的目标Naive CD4 T细胞的上清液轻柔地倒入一个新的收集管中。分离即告完成。
五、注意事项
1. 缓冲液关键：
务必使用FACS Buffer (含EDTA和FBS) 而非PBS进行操作，这能显著提高细胞得率并维持细胞活性。
2. 无菌操作：
整个分离过程应在超净工作台中进行，确保所有操作无菌，防止细胞污染。
3. 试剂保存：
所有组分需4°C保存，切勿冷冻。冻融会导致抗体和磁珠失效。
4. 细胞活性：
处理细胞时动作需轻柔，避免剧烈吹打，以维持细胞最佳活性。
5. 样本质量：
分离效果很大程度上取决于起始PBMC的质量和活性，请确保使用新鲜且活性高的PBMC样本。
6. 浓度要求：
务必按照推荐的细胞浓度（1x10^8 cells/mL）进行操作，这是保证最佳标记效率的关键。
六、相关产品推荐
细胞分选缓冲液：提供专用的细胞分选缓冲液，确保分选过程稳定可靠。
人CD8 T细胞分离试剂盒 (#SN3103)：用于从PBMC中分离CD8阳性T细胞。
人NK细胞分选试剂盒 (#SN3201)：用于从PBMC中分离自然杀伤细胞 (NK Cells)。
T细胞激活磁珠：用于分离后T细胞的体外激活和扩增。
T淋巴细胞培养基 (含血清)：专门用于分离后T细胞的培养和维持。
免疫细胞冻存液：用于分选后珍贵细胞的高效、高活性冻存。
