一、基本信息

产品名称：BeyoTSA™三标四色多重荧光染色试剂盒(488/555/647/DAPI)

产品货号：P1351S / P1351M

规格：100次/400次

保存温度：-20℃避光保存

二、产品介绍

本产品是基于酪酰胺信号放大（TSA）技术的多重荧光染色试剂盒，适用于细胞或组织样本中多个目标蛋白的同时标记与检测。试剂盒包含Tyramide-488、555和647三种荧光染料及DAPI复染剂，可实现在单一样本上对最多三个靶标进行高灵敏度、高信噪比的荧光标记，尤其适用于低丰度蛋白的检测与空间共定位分析。

三、产品应用

本BeyoTSA™三标四色多重荧光染色试剂盒适用于多种细胞与组织样本的多重荧光标记研究。

△多重免疫荧光：用于石蜡切片、冰冻切片或细胞样本中多个蛋白靶点的同时可视化检测。

△低丰度靶标检测：利用TSA信号放大技术，实现对传统方法难以检出的低表达蛋白的高灵敏度检测。

△空间共定位分析：通过多色标记，研究不同蛋白在细胞或组织微环境中的共定位与相互作用关系。

△抗体种属兼容性研究：突破抗体种属限制，允许在同一实验中灵活组合使用不同来源的一抗。

四、产品优势

✅高灵敏度：采用TSA信号级联放大技术，可显著增强荧光信号，适用于低丰度抗原的检测。

✅多重标记：可在单一样本上实现最多三种靶蛋白与细胞核（DAPI）的四色同步标记。

✅种属灵活：独特的抗体洗脱步骤可去除非共价结合的抗体，允许不同种属来源的一抗自由组合使用。

✅信噪比优：优化的试剂体系能有效降低背景荧光，获得清晰稳定的特异性信号。

✅节省抗体：高灵敏度特性使得一抗和二抗的使用量得以显著减少。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 样本准备：根据样本类型（石蜡切片、冰冻切片或细胞样本）进行脱蜡、抗原修复、固定及通透化处理。

2. 酶活性封闭：使用过氧化物酶封闭液处理样本，以淬灭内源性过氧化物酶活性，降低非特异性背景。

3. 抗原封闭：使用合适的封闭液（如BSA或血清）对样本进行封闭，减少非特异性结合。

4. 一抗孵育：滴加针对目标抗原的一抗工作液，于适宜温度下孵育。

5. 二抗孵育：滴加辣根过氧化物酶标记的相应种属二抗工作液进行孵育。

6. TSA反应：滴加相应荧光酪酰胺底物工作液，通过HRP催化反应在抗原位点共价沉积荧光信号。

7. 抗体洗脱：使用增强型抗体洗脱液或热修复法去除上一轮的一抗和二抗复合物，为下一轮标记做准备。

8. 循环标记：重复步骤4至7，依次完成所有目标蛋白的标记。

9. 复染与封片：使用DAPI染色液对细胞核进行复染，随后用抗荧光淬灭封片液封片。

10. 成像分析：使用荧光显微镜或多光谱成像系统观察并采集图像。

六、注意事项

1. 保存条件：试剂盒核心组分需-20℃避光保存，避免反复冻融以保持荧光染料活性。

2. 光谱选择：实验前请根据成像设备的荧光通道参数，确认所选酪酰胺底物的激发/发射光谱是否匹配。

3. 抗体洗脱：抗体洗脱步骤必须彻底，以防止不同轮次标记间的抗体交叉反应。

4. 对照设置：建议设置阳性对照、阴性对照（省略一抗）及自发荧光对照，以确保实验特异性。

5. 荧光淬灭：封片后建议避光保存样本，并尽快完成图像采集，以防荧光信号衰减。

七、相关产品推荐

1. BeyoTSA™双标三色多重荧光染色试剂盒(488/555/DAPI) (货号：P1342)

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3. BeyoTSA™酪酰胺信号放大试剂盒(Tyramide-Biotin) (货号：P1371)

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