一、基本信息

产品名称：Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)

产品货号：D7028S / D7028M

规格：1000U / 5000U

保存温度：-20℃保存

二、产品介绍

Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)是一种源自南极微生物、通过大肠杆菌重组表达的热敏感型碱性磷酸酶。该酶可高效催化去除DNA、RNA、核苷酸5‘或3’末端的磷酸基团，亦可用于蛋白质特定氨基酸残基的去磷酸化。其特点是反应快速、热敏感易失活，且在多种常用缓冲液中活性稳定，适用于分子克隆中防止载体自连、制备末端标记底物及蛋白质去磷酸化研究。

三、产品应用

Antarctic Phosphatase (Thermosensitive)主要用于核酸与蛋白质的去磷酸化操作。

△防止载体自连：通过去除DNA片段5‘末端磷酸基团，有效抑制载体自连，提高克隆效率。

△同步酶切与脱磷：在质粒DNA限制性内切酶消化反应体系中直接加入，实现同步操作。

△制备标记底物：对DNA或RNA进行5‘末端去磷酸化，为后续T4多核苷酸激酶的末端标记反应提供底物。

△清除末端磷酸基团：去除DNA、RNA、rNTP及dNTP分子末端的磷酸基团。

△纯化PCR产物：去除PCR反应体系中的残余dNTP及焦磷酸。

△蛋白质去磷酸化：去除蛋白质丝氨酸、苏氨酸及酪氨酸残基上的磷酸基团。

四、产品优势

✅高效快速：37℃孵育15分钟即可完成对各类DNA末端的高效去磷酸化。

✅热敏感易失活：75℃加热5分钟即可使酶完全失活，无需繁琐的纯化步骤即可进行下游连接反应。

✅缓冲液兼容性广：在多种限制性内切酶及PCR缓冲液中能保持100%以上活性，支持与酶切反应同步进行。

✅末端类型通用：对5‘突出、3’突出及平末端等不同结构的DNA底物，采用相同的反应条件与步骤。

✅高纯度制剂：不含DNA内切酶、外切酶及RNase活性，确保核酸底物的完整性。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 体系配置：于冰上按推荐比例混合DNA/RNA底物、相应反应缓冲液、酶及无核酸酶水。

2. 混合离心：轻轻混匀反应液，短暂离心使液体收集于管底。

3. 温育反应：将反应管置于37℃恒温装置中，孵育15至60分钟以完成去磷酸化。

4. 热失活：将反应管转移至75℃加热块或水浴中，孵育5分钟以彻底灭活磷酸酶。

5. 产物纯化：根据后续实验需求，可选择柱纯化、凝胶回收或沉淀等方法纯化处理后的核酸。

六、注意事项

1. 辅因子需求：酶活性依赖Zn²⁺和Mg²⁺，反应中必须添加配套的10X Reaction Buffer以提供所需离子。

2. 抑制剂规避：EDTA等金属离子螯合剂、无机磷酸盐及DTT等还原剂会抑制或降低酶活性，应避免在反应体系中存在。

3. 储存与操作：使用时置于冰上，用后立即放回-20℃保存；操作时需穿戴实验服与手套。

4. 应用范围限定：本产品仅限用于科学研究，不可用于临床诊断、治疗、食品或药品。

5. 条件优化：用于蛋白质去磷酸化时，酶用量与孵育时间需根据目标蛋白的特性进行预实验优化。

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