一、基本信息

产品名称：T4 DNA连接酶

产品货号：D7006 / D7008

规格：40，000 U / 200,000U

保存温度：-20°C保存

二、产品介绍

T4 DNA连接酶是一种来源于T4噬菌体的重组酶，由大肠杆菌表达生产。该酶能高效催化双链DNA或RNA分子中相邻的5‘-磷酸末端与3’-羟基末端之间形成磷酸二酯键，反应需ATP作为辅助因子。本产品适用于粘性末端或平末端的连接，以及单链缺刻的修复，是分子克隆实验中的核心工具酶。

三、产品应用

T4 DNA连接酶在分子生物学研究中具有广泛的应用。

△分子克隆：用于DNA片段与载体的连接，构建重组质粒。

△缺刻修复：用于修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交链上的单链断裂。

△接头连接：用于连接linker或adaptor至DNA片段末端。

△RNA分析：用于连接酶介导的RNA检测实验。

四、产品优势

✅高纯度：产品不含DNA内切酶、外切酶、磷酸酯酶及RNA酶，确保连接反应特异性。

✅高活性：酶活性经过严格标定，每微升浓度高达1000 U，连接效率稳定可靠。

✅严格定义：酶活性单位定义清晰，以Weiss unit为基准，确保实验结果的可重复性。

✅即用缓冲：提供优化的10X连接缓冲液，含有反应所需的Mg²⁺、DTT和ATP，简化操作。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 载体制备：使用限制性内切酶充分酶切载体DNA，并通过纯化试剂盒或酚氯仿法回收纯化。

2. 插入片段制备：通过PCR扩增或酶切获得目标DNA片段，经凝胶电泳分离后切胶回收纯化。

3. 连接反应：将纯化后的载体与插入片段按适当摩尔比混合，加入10X连接缓冲液及T4 DNA连接酶。

4. 温育：将反应体系置于16°C水浴或恒温金属浴中温育适当时间（通常为30分钟至过夜）。

5. 转化：将连接产物直接用于化学转化感受态细胞，或纯化后用于电击转化。

六、注意事项

1. 温度敏感性：65°C加热10分钟可使酶完全失活，建议在连接产物电泳前进行此步骤以避免条带迁移。

2. 离子抑制：反应体系中NaCl或KCl浓度超过200 mM会强烈抑制酶活性，需注意纯化后DNA的盐浓度。

3. 末端类型：本产品可进行平末端连接，但连接效率相对较低，建议优先选择粘性末端连接或使用快速连接试剂盒。

4. 产物纯化：连接产物用于常规化学转化时无需纯化；用于电击转化前必须进行纯化以去除盐离子。

5. 使用范围：本产品仅供科研使用，不可用于临床诊断、治疗、食品或药品生产。

七、相关产品推荐

1. 快速DNA连接试剂盒（货号：D7002/D7003）

2. PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒（货号：D0033）

3. DNA凝胶回收试剂盒（货号：D0056）

4. 退火缓冲液 for DNA Oligos (5X)（货号：D0251）