一、基本信息

产品名称：Calcein AM/PI Double Staining Kit

产品货号：E-CK-A354

规格：100 Assays / 500 Assays

保存温度：-20°C避光保存

二、产品介绍

本试剂盒是一种基于酯酶活性和细胞膜完整性的双重荧光染色试剂盒，用于区分活细胞与死细胞。Calcein AM被活细胞内的酯酶水解为发出绿色荧光的Calcein，而碘化丙啶（PI）仅能进入膜结构受损的死细胞并与DNA结合产生红色荧光。二者联合使用，可实现活细胞与死细胞的同时可视化与定量分析。

三、产品应用

本试剂盒主要用于基于Calcein AM/PI双染的细胞活性与细胞毒性检测。

△流式细胞术：用于细胞群体中活/死细胞比例的快速定量分析。

△荧光显微成像：用于细胞形态学观察及活/死细胞的直观鉴别与计数。

△药物筛选：评估化合物、药物或处理条件对细胞的毒性效应。

△细胞凋亡/坏死研究：辅助区分不同细胞死亡方式早期的膜完整性变化。

四、产品优势

✅双重标记：通过绿色与红色荧光的同步检测，在一次实验中同时鉴定活细胞与死细胞。

✅高灵敏度：Calcein AM在活细胞内积累产生强绿色荧光，PI与DNA结合产生高信噪比的红色荧光，检测灵敏。

✅操作简便：工作液配制简单，孵育时间短，兼容流式细胞仪和荧光显微镜两种主流检测平台。

✅特异性好：Calcein AM的转化依赖于细胞内源性酯酶活性，PI的摄入依赖于细胞膜完整性的丧失，机制明确，特异性强。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 试剂准备：取出试剂盒组分，室温解冻，涡旋振荡混匀。

2. 工作液配制：根据检测方式（流式或显微）及细胞数量，按比例混合Calcein AM与PI溶液，配制染色工作液。

3. 细胞洗涤：对于悬浮细胞，用PBS离心洗涤；对于贴壁细胞，用PBS轻柔洗涤细胞孔板，以去除培养基。

4. 染色孵育：向细胞中加入适量染色工作液，在推荐温度（室温或37°C）下避光孵育指定时间。

5. 检测分析：孵育完成后，立即使用流式细胞仪进行检测，或在荧光显微镜下观察并采集图像。

六、注意事项

1. 适用范围：本产品仅适用于具有酯酶活性的动物细胞，不适用于植物、细菌或酵母等具有细胞壁的样本。

2. 样本处理：染色前需用不含血清及酚红的缓冲液（如PBS）充分洗涤细胞，以避免血清酯酶或胺类物质的干扰。

3. 离子干扰：洗涤或孵育缓冲液中应避免含有Mn²⁺等金属离子，以防导致荧光淬灭。

4. 染色控制：PI染色时间不宜过长（建议不超过30分钟），以防假阳性结果；对于贴壁不牢的细胞，建议预先进行防脱片处理。

5. 多药耐药：某些表达P-糖蛋白等多药外排泵的细胞系可能导致Calcein AM染料外排，影响染色效率。

6. 仪器设置：使用流式细胞仪时，需根据Calcein（Ex/Em≈494/517 nm）和PI（Ex/Em≈535/617 nm）的荧光特性正确设置检测通道。

7. 保存条件：组分需严格避光保存于-20°C，Calcein AM溶液建议分装保存，以防反复冻融及水解失效。

七、相关产品推荐

1. Calcein AM Assay Buffer（货号：E-CK-A153）

2. Calcein AM Solution (100 μM)（货号：E-CK-A164）

3. Propidium Iodide (PI) Solution(750 μM)（货号：-CK-A165）