一、基本信息

产品名称：T4 DNA Ligase

产品货号：EL0011

规格：1000 Weiss U (200,000 CEU)

保存温度：-20°C

二、产品介绍

本品为来源于T4噬菌体基因30的重组T4 DNA连接酶，催化双链DNA或RNA中相邻的5‘-磷酸与3’-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶能够修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交体中的单链缺口，并连接具有粘性末端或平末端的DNA片段，其活性依赖于ATP作为辅助因子。

三、产品应用

T4 DNA连接酶在分子生物学研究中具有广泛的应用，主要包括：

△分子克隆：用于连接经限制性内切酶切割的DNA片段。

△PCR产物克隆：将PCR扩增产物连接至载体。

△接头/衔接子连接：将双链寡核苷酸接头或衔接子连接到DNA上。

△定点突变：用于相关突变实验中的DNA环化步骤。

△扩增片段长度多态性：用于AFLP分析中的DNA接头连接。

△RNA检测：用于连接酶介导的RNA检测实验。

△缺口修复：修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交体中的单链切口。

△DNA环化：实现线性DNA分子的自身环化。

四、产品优势

✅高比活：酶浓度为5 Weiss U/µL，提供高效的连接效率。

✅底物广泛：可催化双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交体中缺口的连接。

✅末端兼容：既能高效连接粘性末端，也能连接平末端DNA片段。

✅严格质检：经多项核酸酶活性检测，确保无DNA酶、RNA酶及磷酸酶污染。

五、使用说明（实验流程概要）

以下为将DNA插入片段连接至载体DNA的常规流程概要：

1. 体系配制：在冰上配制连接反应体系，包含线性化载体DNA、插入片段、10X连接缓冲液、T4 DNA连接酶及无核酸酶水。

2. 反应孵育：对于粘性末端连接，于22°C孵育10分钟；对于平末端连接，需加入PEG 4000并于22°C孵育1小时。

3. 转化：取部分连接产物用于化学感受态细胞的转化。若进行电转化，建议对DNA进行纯化或对连接酶进行热灭活处理。

六、注意事项

1. 储存条件：本品应始终保存于-20°C，避免反复冻融以维持酶活性。

2. 抑制剂：反应体系中NaCl或KCl浓度高于200 mM会强烈抑制酶活性。

3. 热灭活：可通过65°C加热10分钟或70°C加热5分钟使酶失活。

4. 电转化前处理：若反应体系中酶量超过2 Weiss U（20 µL体系），在电转化前必须对DNA进行纯化。

5. 反应时间：延长反应时间至1小时可增加转化子总数。

七、相关产品推荐

1. T4 DNA Ligase HC, 30 Weiss U/µL (货号：EL0013)

2. 10X T4 DNA Ligase Buffer (货号：B69)

3. Nuclease-free Water (货号：R0581)