一、基本信息

产品名称：NE-PER 细胞核与细胞质蛋白提取试剂

产品货号：78833 / 78835

规格：15mL / 75mL

保存温度：-20°C

二、产品介绍

NE-PER 细胞核与细胞质蛋白提取试剂是一种用于从哺乳动物培养细胞或组织中逐步分离并制备细胞质与细胞核蛋白提取物的试剂盒。该试剂盒采用非变性方法，可在两小时内获得具有生物活性的蛋白质。其原理是通过顺序添加试剂，选择性裂解细胞膜释放细胞质内容物，随后分离完整细胞核并提取核蛋白。所得提取物中细胞核与细胞质组分的交叉污染通常低于10%，纯度足以满足大多数涉及核蛋白提取物的实验需求。

三、产品应用

NE-PER 试剂提取的蛋白提取物适用于多种下游分析应用。

△基因表达调控研究：用于研究转录因子与DNA的相互作用，如凝胶迁移实验（EMSA）。

△蛋白质印迹分析：用于检测特定蛋白在细胞核与细胞质中的定位与表达水平。

△报告基因检测：评估转录因子活性及信号通路对基因表达的调控。

△酶活性测定：分析位于细胞核或细胞质中的酶的活性。

△蛋白质定量分析：与BCA法等蛋白定量试剂兼容，用于测定提取物的蛋白浓度。

四、产品优势

✅高效分离：采用顺序裂解策略，能有效分离细胞质与细胞核组分，交叉污染率低。

✅保持活性：非变性提取条件有助于维持蛋白质的天然构象与生物活性。

✅快速便捷：完整的提取流程可在两小时内完成，操作步骤明确。

✅广泛兼容：获得的蛋白提取物适用于多种常规的下游分子生物学与生物化学分析。

✅灵活可调：可根据实验需求，通过调整核提取试剂的用量来获得不同浓度的核蛋白提取物。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 样品准备：对于贴壁细胞，使用胰蛋白酶消化后离心收集；对于组织，需切碎并匀浆。均用预冷的PBS洗涤细胞或组织块。

2. 初始裂解：向尽可能干燥的细胞沉淀或组织匀浆物中加入预冷的CER I试剂，涡旋混匀，冰上孵育。

3. 膜完全裂解：加入预冷的CER II试剂，涡旋混匀后冰上短暂孵育，然后高速离心。

4. 收集胞质蛋白：立即将上清液（细胞质提取物）转移至新的预冷离心管中，置于冰上。

5. 核蛋白提取：将含有细胞核的沉淀重悬于预冷的NER试剂中，通过间歇性涡旋与冰上孵育进行提取。

6. 收集核蛋白：高速离心后，立即将上清液（核提取物）转移至新的预冷离心管中。

7. 分装储存：将细胞质与细胞核提取物于-80°C条件下保存备用。

六、注意事项

1. 样品新鲜度：试剂盒适用于新鲜制备的细胞或组织样品，不建议使用冻存样品。

2. 蛋白酶抑制：使用前需向CER I和NER试剂中加入蛋白酶抑制剂浓缩液，以维持提取物的完整性。

3. 低温操作：所有离心步骤应在4°C进行，样品及提取物在操作间隙需始终置于冰上。

4. 盐浓度影响：若下游实验需要大量核提取物或遇到检测问题，建议对核提取物进行透析以去除过量盐分。

5. 体积比例：需根据细胞沉淀量或组织重量，严格按照试剂盒提供的表格调整试剂用量，并保持CER I、CER II与NER的体积比例。

6. 用途限定：本产品仅供研究使用，不适用于诊断、治疗或其他临床用途。

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