一、基本信息

产品名称：Pierce™ ECL Western Blotting Substrate

产品货号：32109 / 32209 / 32106

规格：50mL / 250mL / 500 mL

保存温度：2-8°C

二、产品介绍

Pierce™ ECL Western Blotting Substrate是一种基于增强型鲁米诺的化学发光底物，专用于免疫印迹（Western Blot）中辣根过氧化物酶（HRP）的检测。该产品能够检测皮克级含量的抗原，产生的化学发光信号持续时间长，可通过X光胶片或成像系统进行捕捉。通过优化一抗和二抗的稀释度，可获得最佳的信号强度与持续时间。

三、产品应用

本产品Pierce™ ECL Western Blotting Substrate主要用于基于辣根过氧化物酶（HRP）的免疫印迹检测。

△蛋白免疫印迹检测：用于常规Western Blot实验中HRP标记抗体的化学发光检测。

△中高丰度靶标检测：适用于样本中目标蛋白含量相对较高或样本量充足的研究场景。

△信号捕获：产生的化学发光信号可通过X光胶片或CCD成像系统进行记录与分析。

四、产品优势

✅高灵敏度：可检测低至皮克级别的抗原，满足常规检测的灵敏度需求。

✅信号持久：提供持续1至2小时的稳定化学发光信号，便于多轮成像或信号捕捉。

✅操作便捷：即用型试剂组分，仅需等体积混合即可配制工作液，简化实验流程。

✅广泛兼容：适用于多种封闭剂、洗涤缓冲液体系，并与主流成像设备兼容。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 膜洗涤：蛋白转印后，使用去离子水在摇床上振荡洗涤印迹膜5分钟。

2. 封闭：使用合适的封闭剂在室温摇床上封闭30-60分钟，或于2-8°C静置过夜。

3. 一抗孵育：将膜与含有10%封闭液的一抗工作液在室温摇床上孵育1小时，或于2-8°C孵育过夜。

4. 洗涤：使用含有0.05% Tween 20的TBS或PBS等洗涤缓冲液振荡洗涤膜10分钟，并重复此步骤两次。

5. 二抗孵育：将膜与HRP标记的二抗工作稀释液在室温摇床上孵育30分钟至1小时。

6. 彻底洗涤：使用洗涤缓冲液振荡洗涤膜6次，每次5分钟，以充分去除未结合的二抗。

7. 底物配制：等体积混合检测试剂1与检测试剂2，配制底物工作液，确保足以完全润湿膜。

8. 底物孵育：将膜与底物工作液孵育1分钟。

9. 成像检测：取出膜，吸去多余液体，用洁净塑料膜包裹后，立即使用成像系统或X光胶片进行检测。

六、注意事项

1. 优化实验：为获得最佳结果，需对样本量、抗体浓度、孵育时间及洗涤条件等变量进行系统优化。

2. 避免干燥：所有操作步骤中需使用足量溶液，确保印迹膜始终处于湿润状态。

3. 抑制物规避：所有缓冲液中禁止使用叠氮化钠，因其会抑制HRP酶活性。

4. 操作规范：操作时需佩戴手套或使用洁净的塑料镊子；若使用金属器具，需确保无锈迹，以防产生斑点或高背景。

5. 底物稳定性：配制好的底物工作液在室温下仅稳定1小时，且需避免强光直射。

6. 信号异常：若出现信号弱、背景高或信号持续时间短等问题，通常与HRP过量有关，应尝试进一步稀释HRP标记的二抗。

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