一、基本信息

产品名称：Pierce™ Pull-Down Biotinylated Protein:Protein Interaction Kit

产品货号：21115

规格：25次实验用量

保存温度：4°C

二、产品介绍

Thermo Scientific Pierce™ Pull-Down Biotinylated Protein:Protein Interaction Kit 是一款基于链霉亲和素-生物素高亲和力系统的蛋白质相互作用研究工具。该试剂盒采用旋转柱形式，利用固定化链霉亲和素凝胶高效捕获生物素标记的诱饵蛋白，进而从复杂样本中分离与其相互作用的猎物蛋白。其设计旨在实现高回收率与结果可重复性，尤其适用于无融合标签的天然或重组蛋白的互作研究。

三、产品应用

本产品主要用于基于生物素-链霉亲和素系统的蛋白质相互作用下拉实验。

△蛋白质-蛋白质相互作用验证：用于验证和鉴定特定蛋白质之间的直接或间接相互作用。

△互作蛋白筛选：从细胞裂解液等复杂样本中筛选与已知生物素化蛋白结合的未知互作伙伴。

△复合物分离：在接近天然条件下分离特定的蛋白质复合物，用于后续分析。

△对照实验设置：提供进行必要阴性对照（未处理凝胶）和阳性对照（固定诱饵）的实验方案。

四、产品优势

✅高亲和力捕获：基于链霉亲和素与生物素之间不可逆的高亲和力结合，确保诱饵蛋白的牢固固定。

✅低背景干扰：通过专用的生物素封闭液和可优化的洗涤步骤，有效降低非特异性结合，提高信噪比。

✅猎物蛋白纯净：洗脱过程在酸性条件下进行，可使猎物蛋白与固定的诱饵蛋白解离，从而获得不含诱饵蛋白污染的纯净猎物蛋白样品。

✅操作便捷：采用预制旋转柱形式，在捕获、洗涤和洗脱步骤中可完全保留凝胶，操作简单且减少样品损失。

✅灵活兼容：适用于各种来源的蛋白，包括无标签的天然蛋白、重组蛋白以及细胞裂解物中的目标蛋白。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 凝胶预处理：重悬固定化链霉亲和素凝胶，装柱，使用TBS缓冲液平衡离心三次。

2. 诱饵固定：将生物素化诱饵蛋白加至平衡后的凝胶柱，4°C孵育结合，离心收集流穿液。

3. 位点封闭：使用生物素封闭液处理凝胶，以封闭未结合的链霉亲和素位点，减少非特异性吸附。

4. 猎物捕获：将含有潜在互作蛋白的样本加至固定有诱饵的凝胶柱，4°C孵育，离心收集未结合组分。

5. 严格洗涤：使用洗涤缓冲液多次清洗凝胶柱，去除未特异性结合的杂质蛋白。

6. 酸性洗脱：使用低pH洗脱缓冲液将结合的猎物蛋白从固定化的诱饵上解离下来，并用中和缓冲液立即中和。

六、注意事项

1. 样本准备：实验前需确保诱饵蛋白已完成纯化、生物素化，并去除未反应的生物素化试剂。

2. 对照设置：为获得可靠结果，必须同时设置未处理凝胶的阴性对照和固定诱饵的阳性对照。

3. 缓冲液配制：提供的TBS干粉需用超纯水复溶并过滤除菌，中和缓冲液需用户自备。

4. 孵育条件：蛋白结合孵育需在4°C轻柔摇荡进行，避免涡旋振荡导致非特异性结合或蛋白变性。

5. 洗脱中和：洗脱缓冲液为酸性，收集管中需预先加入中和缓冲液，以防止洗脱蛋白酸变性。

6. 条件优化：洗涤步骤的严格性（如盐浓度）需根据具体蛋白相互作用强度进行预实验优化。

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