一、基本信息

产品名称：Cellfectin™ II Reagent

产品货号：10362100

规格：1 mL

产品组分：阳离子脂质体转染试剂

递送分子类型：DNA (杆状病毒DNA或质粒DNA)

细胞类型：Sf9、Sf21和High Five™昆虫细胞

二、产品概述

Cellfectin™ II Reagent是一种阳离子脂质体转染试剂，专为昆虫细胞的高效转染而设计。它适用于Bac-to-Bac™、BaculoDirect™和InsectSelect™等杆状病毒表达系统，以及常规的质粒DNA转染，能够将外源基因高效导入Sf9、Sf21和High Five™细胞中，用于重组蛋白表达和病毒生产。

三、产品应用

△杆状病毒生产：用于将Bac-to-Bac™系统的杆状病毒基因组DNA或BaculoDirect™系统的LR重组反应产物转染至昆虫细胞，以产生重组杆状病毒。

△重组蛋白表达：用于将携带目标基因的质粒DNA转染至Sf9、Sf21或High Five™细胞，实现重组蛋白的瞬时表达。

四、产品优势与特点

✅高效转染：针对Sf9、Sf21和High Five™等昆虫细胞进行了优化，可实现较高的转染效率。

✅系统兼容性：与多种昆虫细胞培养基兼容，包括Grace’s Insect Medium、Sf-900™ II/III SFM和Express™ Five SFM。

✅操作简便：提供标准化的转染流程，复合物形成时间短，实验步骤清晰明确。

✅灵活性：可根据具体实验需求，通过调整细胞密度、DNA与试剂用量以及孵育时间对转染条件进行优化。

五、使用说明（概述）

以下概述了以6孔板为例的瞬时DNA转染方案的关键步骤：

1. 细胞准备：在转染时，确保每孔接种约8×10^5个细胞，并使用含1.5%血清的铺板培养基。

2. 试剂稀释：使用前将Cellfectin™ II Reagent轻轻混匀，取适量用无血清培养基稀释。

3. DNA稀释：将1-3 µg杆状病毒DNA或质粒DNA用无血清培养基稀释至一定体积。

4. 复合物形成：将稀释后的DNA与稀释后的转染试剂等体积混合，轻柔混匀后在室温孵育15-30分钟以形成DNA-脂质体复合物。

5. 细胞转染：将DNA-脂质体复合物逐滴加入已更换为低血清培养基的细胞中。

6. 换液培养：转染3-5小时后，移除转染复合物，更换为含10%血清的完全生长培养基，并于27°C继续培养。

六、注意事项

1.储存条件：本品需在4°C保存，请勿冷冻。

2.使用前处理：使用前请将试剂瓶颠倒混匀5-10次。

3.培养基要求：配制DNA-脂质体复合物时必须使用无血清培养基；转染步骤中细胞培养基的血清浓度应为1.5%。

4.抗生素：转染过程中，培养基内请勿添加抗生素。

5.复合物稳定性：稀释后的转染试剂或配制好的DNA-脂质体复合物在室温下放置时间不宜超过30分钟。

6.条件优化：为获得最佳转染效果，建议根据具体细胞类型和表达系统对DNA用量、试剂用量及孵育时间进行优化。

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