一、基本信息

产品名称：Lipofectamine™ 3000 转染试剂

品牌：Thermo Fisher Scientific

货号：L3000001/L3000008/L3000015/L3000075/L3000150

规格：0.1 mL、0.75 mL、1.5 mL、5 × 1.5 mL、15 mL

递送分子类型：DNA（质粒）、siRNA

细胞类型：多种真核细胞系，包括难转染细胞

二、产品概述

Lipofectamine™ 3000是一种高效、专利配方的阳离子脂质体转染试剂，专为将核酸（如质粒DNA和siRNA）递送至多种哺乳动物细胞系而设计。该试剂具有高转染效率和低细胞毒性，适用于血清存在条件下的转染，操作简便，转染后无需更换培养基。

三、产品应用

△基因功能研究：通过瞬时过表达或敲低目标基因，用于研究特定基因在细胞中的功能。

△蛋白表达与生产：在哺乳动物细胞中高效表达重组蛋白，适用于蛋白纯化、抗体生产等下游应用。

△CRISPR基因编辑：递送CRISPR-Cas9系统组分（如质粒、gRNA），实现高效的基因敲除或敲入。

△RNA干扰研究：高效转染siRNA，用于特异性敲低目标基因的mRNA，研究基因功能丧失表型。

四、产品优势与特点

✅高转染效率：采用专利阳离子脂质配方，对多种细胞系，尤其是难转染细胞，均能实现高效核酸递送。

✅操作流程简便：转染复合物可直接加入含血清的完全培养基中，无需后续更换或移除培养基，简化实验步骤。

✅细胞毒性低：优化的脂质体组分在保证高转染效率的同时，最大程度降低对细胞的毒性，利于细胞后续生长与实验。

✅适用性广泛：兼容DNA与siRNA的转染，并能在血清和抗生素存在条件下进行，提高了实验的灵活性与便利性。

五、使用说明（概述）

1. 细胞准备：在转染前一天，将细胞接种于培养板中，使其在转染时达到70-90%的汇合度。

2. 试剂稀释：使用Opti-MEM™减血清培养基分别稀释适量质粒DNA与P3000™增强剂，以及Lipofectamine™ 3000试剂。

3. 复合物形成：将稀释后的DNA-P3000™混合物与稀释后的Lipofectamine™ 3000试剂轻轻混合，室温孵育10-15分钟以形成DNA-脂质体复合物。

4. 复合物添加：将孵育好的转染复合物逐滴加入含有细胞和完全培养基的培养孔中，轻轻摇晃培养板使其混匀。

5. 细胞孵育：将细胞放回培养箱中继续培养1-3天，随后进行下游检测与分析。

六、注意事项

1. 储存条件：本试剂需在4°C条件下避光保存，请勿冷冻，以免影响脂质体活性。

2. 细胞状态：转染成功的关键在于使用处于对数生长期、状态良好的细胞，且汇合度需严格控制在推荐范围内。

3. 试剂优化：对于新的细胞系或实验条件，建议按照指南测试Lipofectamine™ 3000试剂的高低两个剂量，以确定最佳转染条件。

4. siRNA转染：当转染siRNA时，实验方案中应省略P3000™增强剂的使用步骤。

5. 无菌操作：整个转染过程需在无菌条件下进行，使用无菌的试剂和耗材，以防污染。

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