一、基本信息

产品名称：支原体检测巢式PCR引物试剂盒

产品货号：6601

规格：50 μl反应×100 次量

保存温度：-20℃

二、产品介绍

本产品为用于检测细胞培养物等生物样本中支原体污染的巢式PCR引物试剂盒。该试剂盒基于16S-23S rRNA基因间隔区设计特异性引物，通过两轮PCR扩增，可快速、高灵敏度地检测包括发酵支原体、猪鼻支原体等在内的11种常见支原体以及解脲脲原体。相较于传统培养法，本方法可在数小时内完成检测，操作简便。

三、产品应用

本支原体检测巢式PCR引物试剂盒主要用于细胞培养实验室的支原体污染监控。

△细胞系质量控制：用于常规细胞培养过程中的支原体污染筛查。

△生物制品安全检测：用于疫苗、抗体、重组蛋白等生物制品生产过程中的支原体污染检测。

△实验室污染溯源：辅助鉴定实验室环境中支原体污染的来源。

四、产品优势

✅高特异性：针对支原体16S-23S rRNA基因间隔区保守序列设计引物，特异性扩增支原体DNA，与人源及鼠源基因组DNA无交叉反应。

✅高灵敏度：采用巢式PCR技术，检测下限可达pg级别，能够有效检出低载量污染。

✅广谱检测：可同时检测11种常见支原体及1种脲原体，覆盖多种实验室常见污染源。

✅快速便捷：从样本处理到结果分析可在一天内完成，远快于传统培养方法。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 样本处理：收集细胞培养上清或裂解细胞悬液作为模板，复杂样本建议进行DNA提取。

2. 一扩体系配制：于冰上按顺序混合灭菌水、10×PCR Buffer、dNTP Mixture、F1/R1引物对及DNA聚合酶。

3. 一扩反应：向反应体系中加入不超过5μl的待测样本模板，在PCR仪上运行程序（94℃ 30秒；55℃ 2分钟；72℃ 1分钟，循环30-35次）。

4. 二扩体系配制：配制新的反应混合液，包含F2/R2引物对及其他PCR组分。

5. 二扩反应：取0.5μl一扩产物作为模板，加入二扩反应体系，运行PCR程序（参数同一扩）。

6. 电泳分析：分别取一扩及二扩产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据预期片段大小判断结果。

六、注意事项

1. 污染防控：巢式PCR灵敏度极高，必须严格分区操作，防止PCR产物及对照模板的气溶胶污染。

2. 对照设置：必须设置包含内对照模板的阳性对照反应，以排除样本中PCR抑制物的干扰。

3. 结果判读：内对照模板仅用于验证反应体系有效性，样本结果的判定应基于未添加内对照的独立反应。

4. 引物覆盖度：本试剂盒检测依赖于靶序列的完整性，若支原体DNA发生引物结合区突变，可能导致假阴性结果。

5. 样本类型：对于成分复杂的样本，建议先进行DNA纯化，以去除可能存在的PCR抑制物。

七、相关产品推荐

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