一、基本信息

产品名称：Opal™ 4-Color Manual IHC Kit

产品货号：NEL810001KT

规格：50张玻片检测

保存温度：干态Opal试剂储存于-20°C，DMSO重组后储存于2-8°C，其他组分储存于2-8°C。

二、产品介绍

Opal™ 4-Color Manual IHC Kit是基于酪酰胺信号放大（TSA）技术的检测系统，专为在单张甲醛固定石蜡包埋（FFPE）组织切片上进行4色多重标记而设计。该方法通过微波处理（MWT）步骤有效去除抗体并降低背景，允许在同一组织样本中连续检测多个靶标，适用于空间表型分析等高级研究。

三、产品应用

本产品适用于在FFPE组织切片上进行多重荧光免疫组化分析。

△多重免疫荧光：在同一张组织切片上对4个不同靶标进行同时可视化。

△空间表型分析：研究肿瘤微环境中不同细胞亚群的空间分布与相互关系。

△生物标志物共定位：分析多个蛋白标志物在细胞或亚细胞水平的共表达情况。

△FFPE样本分析：适用于存档的临床FFPE组织样本的回顾性研究。

四、产品优势

✅高重数：支持在单张切片上实现4色高重荧光标记，获取更多维度的信息。

✅信号稳定：Opal荧光团经酪酰胺沉积后，其信号在后续的微波处理与抗体剥离步骤中保持稳定。

✅低背景干扰：整合的微波处理步骤能有效去除非特异性结合的抗体，显著降低背景荧光和自发荧光。

✅顺序检测：采用循环染色与抗体剥离策略，避免了不同一抗/二抗种属来源可能引起的交叉反应。

✅兼容性强：专为FFPE组织优化，与常规免疫组化流程兼容，适用于多种研究级一抗。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 样本准备：对FFPE组织切片进行脱蜡、水化及抗原修复。

2. 内源酶阻断：使用过氧化物酶阻断剂处理，以消除内源性过氧化物酶活性。

3. 蛋白封闭：应用阻断缓冲液孵育，减少非特异性结合。

4. 一抗孵育：滴加目标特异性一抗工作液，于湿盒中孵育。

5. 二抗孵育：加入HRP标记的聚合物二抗进行孵育。

6. 荧光标记：应用对应Opal荧光团-酪酰胺工作液，通过酶促反应沉积荧光信号。

7. 抗体剥离：对切片进行微波处理，以洗脱上一轮结合的一抗和二抗复合物。

8. 循环检测：重复步骤3至7，进行下一个靶标的检测循环。

9. 复染封片：使用DAPI对细胞核进行复染，最后用抗荧光淬灭封片剂封片。

10. 成像分析：使用兼容的多光谱荧光成像系统进行图像采集与分析。

六、注意事项

1. 储存条件：未复溶的Opal荧光染料干粉需保存于-20°C，复溶后应避光保存于2-8°C，避免反复冻融。

2. 安全防护：部分组分含DMSO、Proclin® 300及DAPI，操作时应佩戴手套、安全眼镜，并在通风橱中进行，避免接触皮肤与眼睛。

3. 抗体验证：用于多重检测的各一抗需在单标实验中独立验证其特异性与最佳稀释度。

4. 顺序优化：多重检测中靶标的染色顺序可能影响结果，建议根据荧光团亮度及靶标丰度进行优化。

5. 成像要求：推荐使用具备光谱拆分功能的多光谱成像系统，以准确解析各荧光信号并去除自发荧光。

6. 仅供研究：本产品仅限用于科学研究，不可用于临床诊断。

七、相关产品推荐

1. 1X Opal Anti-Ms + Rb HRP（货号：ARH1001EA）

2. Opal 520 Reagent Pack（货号：FP1487001KT）

3. Opal 690 Reagent Pack（货号：FP1497001KT）

4. 10×AR6 Buffer（货号：AR600250ML）