一、基本信息

产品名称：Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆试剂盒

产品货号：10911ES08 / 10911ES20 / 10911ES50

规格：5次反应， 20次反应， 50次反应

保存温度：-20℃保存

二、产品介绍

Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 是一款基于同源重组原理的DNA定向克隆试剂盒。该产品通过在线性化载体末端与PCR引物5‘端设计同源序列，利用高效重组酶在50℃下仅需20分钟即可完成载体与插入片段的连接，无需传统酶切连接步骤。适用于50 bp至10 kb长度片段的快速克隆，阳性克隆率通常高于95%。

三、产品应用

本产品主要用于DNA片段的快速定向克隆，具体应用包括：

△快速克隆：将PCR产物高效、快速地克隆至目标载体。

△定向克隆：实现插入片段在载体中的精确、定向整合。

△定点突变：通过引物设计，在克隆过程中引入特定点突变。

四、产品优势

✅高效重组：采用优化的重组酶预混体系，反应快速，20分钟即可完成体外重组。

✅高阳性率：克隆阳性率高，通常可达95%以上，有效减少后续筛选工作量。

✅操作简便：单步反应完成连接，无需传统限制性内切酶消化和DNA连接酶处理。

✅广泛兼容：可克隆长度范围广（50 bp-10 kb），且适用于大多数常见载体。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 载体线性化：选择合适的酶切位点，对目标载体进行完全线性化。

2. 引物设计与PCR扩增：在插入片段扩增引物的5‘端添加15-25 bp与线性化载体两端匹配的同源序列。

3. DNA定量：建议通过琼脂糖凝胶电泳对线性化载体和PCR插入片段进行精确定量。

4. 重组反应：将定量后的载体与插入片段按推荐摩尔比加入重组酶预混液，于50℃孵育20分钟。

5. 转化涂板：将重组产物转化至感受态细胞，涂布于含相应抗生素的平板进行培养。

6. 克隆鉴定：挑取单克隆，通常采用菌落PCR方法进行快速鉴定。

六、注意事项

1. 引物设计：确保引物5‘端同源序列与线性化载体末端完全匹配，且长度适宜（15-25 bp）。

2. 载体质量：确保载体完全线性化且纯化充分，残留的环状模板可能导致高背景。

3. 定量准确：推荐使用凝胶电泳法准确定量DNA，不准确的摩尔比会影响重组效率。

4. 反应控制：建议每次实验设置试剂盒提供的阳性对照，以确认反应体系正常工作。

5. 产物纯化：PCR扩增的插入片段建议进行纯化以去除引物二聚体等杂质。

6. 安全规范：操作时请穿戴实验服与手套，所有组分仅限科研使用。

七、相关产品推荐

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