一、基本信息
产品名称:Western及IP细胞裂解液
产品货号:P0013
规格:100ml
保存温度:-20°C
二、产品介绍
Western及IP细胞裂解液是一种非变性细胞裂解试剂,适用于从动物、植物、真菌及细菌的细胞或组织中温和地提取总蛋白。其配方能有效抑制蛋白降解,最大限度地保持蛋白质的天然构象及蛋白质间的相互作用,为后续的Western Blot、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)及ELISA等蛋白质功能研究实验提供高质量的蛋白样品。
三、产品应用
本产品适用于多种基于蛋白质分析的实验研究,具体应用包括:
△蛋白质电泳:用于SDS-PAGE或非变性PAGE的蛋白样品制备。
△免疫印迹:为Western Blot实验提供高质量的蛋白裂解物。
△免疫沉淀:适用于常规的免疫沉淀(IP)实验。
△免疫共沉淀:用于研究蛋白质相互作用的Co-IP实验。
四、产品优势
✅温和裂解:采用非变性条件,有效维持蛋白质的天然构象及复合物稳定性。
✅广泛兼容:适用于动物、植物、真菌及细菌等多种来源的细胞和组织样品。
✅抑制全面:内含多种蛋白酶及磷酸酶抑制剂,可有效防止样品中蛋白的降解与去磷酸化。
✅应用广泛:裂解产物可直接用于Western Blot、IP、Co-IP、ELISA等多种下游蛋白分析实验。
五、使用说明(实验流程概要)
1. 试剂准备:将裂解液置于冰上融解,混匀后,按实验需要加入苯甲基磺酰氟(PMSF)或专用的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
2. 细胞样本处理:针对贴壁细胞,吸弃培养液后直接加入裂解液;针对悬浮细胞,需先离心收集细胞沉淀,再加入裂解液重悬裂解。
3. 组织样本处理:将新鲜或冷冻组织剪切成细小碎片,加入适量裂解液,随后使用玻璃匀浆器或组织研磨仪进行充分研磨。
4. 裂解:将含有样本的裂解液在冰上持续孵育一定时间(通常 15-30 分钟),期间可涡旋震荡以促进裂解。
5. 离心澄清:在 4°C 条件下,以 12,000-14,000 g 离心 10-15 分钟,小心吸取上清液,即为总蛋白样品,可进行浓度测定或直接用于后续实验。
六、注意事项
1. 储存与分装:为保持最佳活性,建议分装保存于-20°C,并避免反复冻融。
2. 抑制剂添加:使用前需自备并添加苯甲基磺酰氟(PMSF)或相应的蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物,以增强抑制效果。
3. 操作温度:所有裂解步骤应在冰上或4°C环境下进行,以防止蛋白降解。
4. 浓度测定:裂解液中的Triton X-100等成分会干扰Bradford法,推荐使用BCA法进行蛋白浓度测定。
七、相关产品推荐
1. RIPA 裂解液(强)(货号:P0013B):适用于需要强效裂解及去垢条件的 Western Blot 实验,能提取膜蛋白或核蛋白。
2. RIPA 裂解液(中)(货号:P0013C):提供中等强度的裂解能力,平衡了裂解效率与蛋白相互作用保持,用途广泛。
3. 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(货号:P0027):用于分别提取细胞浆和细胞核内的蛋白质,进行亚细胞定位研究。
4. 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒(货号:P0033):专门针对膜蛋白的难溶特性设计,用于高效提取细胞膜或组织膜蛋白组分。
5. 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型 , 50X)(货号:P1045):为各种裂解液提供即用型的全面蛋白酶与磷酸酶抑制保护。