一、基本信息

产品名称：Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒

产品货号：CA1630

规格：100T/250T/500T（以96孔板为例）

保存温度：-20°C避光干燥保存

二、产品介绍

本试剂盒基于Calcein-AM与碘化丙啶（PI）两种荧光探针，用于同时区分和检测细胞群体中的活细胞与死细胞。Calcein-AM被活细胞内的酯酶水解后产生绿色荧光，而PI仅能进入膜完整性受损的死细胞并与DNA结合产生红色荧光，二者结合可实现快速、准确的双重染色与定量分析。

三、产品应用

本试剂盒适用于基于荧光检测的细胞活力与毒性分析。

△细胞活力检测：用于评估药物处理、基因编辑或环境因素对细胞存活率的影响。

△细胞毒性筛选：在化合物库筛选或纳米材料生物安全性评价中，快速鉴别毒性物质。

△凋亡与坏死区分：辅助区分细胞死亡模式，如早期凋亡与晚期凋亡/坏死细胞。

△荧光显微镜成像：适用于在荧光显微镜下直接观察并统计活细胞与死细胞的比例。

△酶标仪定量分析：适用于在荧光酶标仪上进行高通量的细胞活力定量检测。

四、产品优势

✅特异性：Calcein-AM和PI分别基于细胞内酯酶活性与细胞膜完整性进行标记，染色特异性高，相互干扰小。

✅灵敏度：荧光信号明亮，能够有效检测低比例的活细胞或死细胞，结果可靠。

✅低毒性：Calcein-AM对细胞功能影响极小，适用于需要后续培养或功能检测的实验。

✅便捷性：试剂盒提供优化比例的预配溶液，简化了工作液配制流程，操作简便。

✅兼容性：两种染料的荧光信号可被同一激发波长（~490 nm）有效激发，便于同时观察与检测。

五、使用说明（实验流程概要）

1. 溶液配制：将10×Assay Buffer用去离子水稀释10倍，获得1×Assay Buffer工作液。

2. 细胞准备：收集细胞，用1×Assay Buffer洗涤两次，以去除培养基及残留的酯酶活性。

3. 细胞重悬：使用1×Assay Buffer将细胞重悬至合适浓度（约1×10^5 - 1×10^6个/mL）。

4. Calcein-AM染色：向细胞悬液中加入Calcein-AM原液，混匀后于37°C避光孵育20-25分钟。

5. PI染色：向上述体系中加入PI原液，室温避光继续孵育5分钟。

6. 清洗检测：离心去除染色液，用PBS清洗并重悬细胞后，立即进行荧光显微镜观察或酶标仪检测。

六、注意事项

1. 安全防护：操作时需穿戴实验服与手套。PI为潜在致癌物，应避免接触皮肤，若接触需立即用大量清水冲洗。

2. 避光操作：染色及后续步骤需全程避光，以防荧光探针淬灭。

3. 浓度优化：不同细胞系对染料的最佳工作浓度可能存在差异，建议初次实验时设置浓度梯度进行优化。

4. 样品处理：对于贴壁细胞，可根据实验设计选择消化后染色或直接对孔板内的细胞进行染色。

5. 试剂保存：Calcein-AM溶液对温度敏感，建议分装冻存于-20°C，避免反复冻融，稀释后建议当日使用。

七、相关产品推荐

1. 细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-FITC/PI法）（货号：CA1020）

2. 细胞计数试剂盒（CCK-8法）（货号：CA1210）